诊断原发性单纯疱疹，根据下列几点：
① 发热及表现其他全身症状的小儿，如同时出现小泡状皮疹，应疑及本病。特别要重视口唇及其附近的皮肤和粘膜，如见颊内和牙龈发生小滤泡或小溃疡，更属可疑。
② 可从局部病变(包括水泡液、咽拭子、脑脊液等)在4天内分离病原毒。如无条件作病毒分离，可将水泡内容物接种于兔的角膜划痕，如检查角膜细胞涂片时看到典型的嗜酸性包涵体，可证实诊断。
③ 从疱疹或溃疡采取刮除物标本，涂片作镜检，以苏木紫和伊红染色可见典型的核内包涵体和多核巨细胞，也可利用免疫荧光技术或电镜检查证实病原体。
④ 双份血清检查抗体对原发性感染很有帮助，一般可见痊愈期抗体滴度超过急性期水平四倍或更高。
单纯疱疹性口炎须与肠道病毒所致的疱疹性咽峡炎鉴别，后者流行于夏秋季，以骤起发热、拒食、流涎与吞咽时疼痛为主，偶见呕吐与腹泻，其口腔病变主要出现在咽峡及软腭，不象单纯疱疹那样涉及颊内粘膜、舌及牙龈，因此鉴别较易。此外，还要与波及口唇和鼻孔口的传染性脓疱病、局限于外阴部的白色念珠菌外阴阴道炎等相区别。
