构建免疫球蛋白与细胞因子融合基因做家族特异性抗淋巴瘤疫苗...

目的：构建免疫球蛋白重链可变区（IgHV）基因片段与细胞因子GM-CSF（粒细胞集落刺激因子）或IL-2（白细胞介素2）的融合基因表达载体，作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗，并接种给动物，了解该疫苗的抗淋巴瘤免疫功能。
方法：从脐带血免疫球蛋白基因库中获得6个片段长度差异较大的IgHV3片段基因，进行测序，然后利用生物信息学资源进行分析，预测其重链可变区域的T细胞表位，同时还分析了我们实验室以前构建的16个IgHV片段。我们选择了含有大部分T细胞表位的IgHV1和IgHV3基因，并将框架区（FR）为主的IgHV（FR）基因片段和IgHV（FR）与GM-CSF或IL-2基因连接形成的融合基因克隆到真核表达载体中。表达载体通过脂质体转染COS细胞，用ELISA法测定GM-CSF或IL-2的表达。一些表达载体被用作核酸疫苗来免疫小鼠，通过间接免疫荧光和细胞因子分泌试验检测对同一家族的淋巴瘤和正常淋巴细胞的免疫反应。
结果：计算机评分系统预测显示，每个IgHV序列中分别存在约30个左右受HLA位点限制的T细胞表位，90%以上的T细胞表位位于框架区，积分排名中前10%的T细胞表位全部位于框架区。成功构建了IgHV1(FR)和IgHV3(FR)的真核表达载体，去除CDR3区域后，主要是框架区(FR)。成功构建了IgHV1和IgHV3基因与GM-CSF或IL-2基因的融合基因表达载体。IgHV(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0中GM-CSF的表达量比对照组高出200倍以上；IgHV(FR)-IL-2/pcDNA3.0中，IgHV1(FR)-IL-2免疫动物组在第一次免疫后第2周开始检测到针对属于IgHV1家族的淋巴瘤Namalwa细胞系的抗体，IgHV1(FR)组在第4周开始检测到抗Namalwa细胞抗体。IgHV3(FR)-IL-2组在第一次免疫后第2周开始检测针对属于IgHV1家族的淋巴瘤Namalwa细胞系的抗体。第一次免疫后第2周开始检测到针对属于IgHV3家族的传代淋巴细胞系的抗体，IgHV3(FR)组在第4周开始检测到抗体。IgHV(FR)-IL-2组免疫小鼠的血清IFN-γ水平明显高于pcDNA3.0和IgHV(FR)组。