操作方法:
取试管6支,其中3支各精密加入对照品溶液1ml,另3支各精密加入供试品溶液1ml,置37℃±0.5℃水浴中,保温5 分钟,精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5ml,摇匀,并准确计时,在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟。立即精密加入5%三氯醋酸溶液 5ml,摇匀,滤过,取续滤液备用。另取试管2支,各精密加入血红蛋白试液5ml,置37℃±0.5℃水浴中保湿10分钟,再精密加入5%三氯醋酸溶液 5ml,其中1支加供试品溶液1ml,另1支加上述盐酸溶液1ml,摇匀,滤过,取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照,照分光光度法(附录ⅣA) 在275nm的波长处测定吸收度,算出平均值AS和A,按下式计算:A×Ws×n。
每1g含蛋白酶活力(单位)=As×W×10×181.19式中,AS为对照品的平均吸收度;A为供试品的平均吸收度;Ws为对照品溶液每1ml中含酪氨酸的量,μg;W为供试品取样量,g;n为供试品稀释倍数。
在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmol酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力单位。