1.空腹血漿胰島素和血糖測定 低血糖患者血漿葡萄糖<2.8mmol/L。非肥胖者空腹胰島素水平高於24μU/ml可認為是高胰島素血癥。然而有時空腹胰島素值即使正常，相對血糖值已增高。當空腹血糖低於2.8mmol/L，血漿胰島素應降至10μU/ml以下。血漿葡萄糖水平低於2.2mmol/L，胰島素值將低於5μU/ml。如空腹胰島素/空腹血糖>0.3應懷疑有高胰島素血癥，如>0.4提示胰島素瘤可能。
2.口服葡萄糖耐量試驗(OGTT) 欲確定是否存在空腹低血糖，OGTT沒有意義。如糖耐量試驗延長至4～5小時，對於診斷餐後低血糖有一定價值。
3.血漿胰島素原和C肽測定 正常血漿含有少量的胰島素原，大部分胰島素瘤患者血循環中胰島素原水平增高。正常情況下，胰島素原一般不超過免疫反應性胰島素總量的22%，而85%以上的胰島素瘤患者的胰島素原所佔百分比超過25%。
用RIA法測定的血漿胰島素值稱為免疫反應性胰島素，這是因為胰島素的多克隆抗體與胰島素原等胰島素類似物有交叉反應，再加上胰島素的正常值較低，所以解釋結果時要十分慎重。
