接种乙肝疫苗是预防HBV感染的最有效方法。乙肝疫苗接种的主要对象是新生儿，其次是婴幼儿、15岁以下未接种者和高危人群（如医务人员、经常接触血液的人、在托儿所工作的人、器官移植患者、经常接受输血或血液制品的人、免疫力低下的人、易受外伤的人、HBsAg阳性者的家庭成员、男男性行为者或多个性伙伴、静脉注射毒品的人）。乙型肝炎疫苗需要全程接种）。按照0、1和6个月的程序，整个疗程需要接种三剂乙肝疫苗，即在第一次接种后，每隔1个月和6个月接种第二和第三剂。新生儿的乙肝疫苗需要在出生后24小时内接种，越早越好。新生儿的接种部位是臀部前侧肌肉内，儿童和成人的接种部位是上臂三角肌中部肌肉内。
HBsAg阴性母亲的新生儿可接种5微克或10微克酵母或10微克CHO乙肝疫苗；新生儿时未接种乙肝疫苗的儿童应接种5微克或10微克重组酵母或10微克CHO乙肝疫苗的补种剂量；对于成年人，建议接种20微克酵母或20微克CHO乙肝疫苗。对于免疫力低下或无反应者，应增加疫苗剂量（如60μg）和接种次数；对3剂免疫程序无反应者可再接种3剂，并在第二次3剂乙肝疫苗接种后1至2个月检测血清中的抗HBs；如果仍无反应，可接种1剂60μg重组酵母乙肝疫苗。
对于有抗体反应的人来说，接种乙肝疫苗的保护作用一般至少持续12年；因此，一般人群不需要进行抗HBs监测或加强免疫。但是，对于高危人群可以进行抗-HBs监测，如果抗-HBs<10 mIU/mL，可以进行加强免疫。
