复合中药对多血症模型中大鼠行为的影响

　　【关键词】 多发性抽动症，六君子汤合泻青丸，亚氨基二丙腈，行为学小儿多发性抽动症又称 Tourette 综合征（Tourette syndrome，TS），主要发生在儿童和青少年时期，是以反复、迅速、突发、刻板的运动和发声抽动为主的神经精神障碍，临床常表现为挤眉、眨眼、咧嘴、耸肩、仰颈、扭肩、吭吭，甚至踢腿、跺脚等。
　　治疗多使用抗精神病类药物多巴胺受体阻制剂 （如氟哌啶醇、泰必利等）以及 α2 受体激动剂（如可乐定）。本研究通过拟 TS 小鼠模型的行为学改变， 对六君子汤合泻青丸与泰必利进行药效学比较，为复方中药的临床应用提供实验学依据。
　　1、 材料与方法
　　1.1 实验材料
　　1.1.1 实验动物：ICR 小鼠，40 只，雄性，体重（18±2）g。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供 ，SPF级，合格证号：SCXK（京）2007-0001。
　　基础饲料为实验鼠全价颗粒饲料，自由饮水，饲养温度（22±2）℃，湿度 50 ％～55 ％，饲养 1 周后无异常供实验用。
　　1.1.2 试剂与仪器：（1）试剂：亚氨基二丙腈（IDPN）100mL，购自美国
　　Sigma 公司。 （2）仪器：ZIL-2 小鼠自主活动程序自动控制仪，
　　中国医学科学院药物研究所研制；SONY HDR-XR100E 摄像机。
　　1.1.3 实验药物：（1）六君子汤合泻青丸加味：中药均为免煎颗粒，其中太子参 10 g、炒白术 10 g、茯苓 10
　　g、陈皮 6 g、法半夏 6 g、防风 6 g、当归 10 g、钩藤 10 g、青礞石 10 g 为江苏天江药业有限公司生产，羌活 10 g、酒大黄 10 g、川芎 6g 、栀子 10 g、龙胆草 6 g 为广东一方制药有限公司生产，所有中药均在北京中医药大学东方医院购买。 （2）泰必利（盐酸硫必利）：江苏天士力帝益药业有限公司生产国药准字 H32025477。
　　1.2
　　实验方法
　　1.2.1 IDPN 小鼠模型的建立及分组：40 只小鼠随机分为 4 组，每组 10 只，参照 Bruce
　　等[1]的方法建立模型。 （1）空白组：腹腔注射 0.9 ％生理盐水，每只 0.3mL，每天 1 次，连续 7 天；腹腔注射的同时给予生理盐水 20 mL?kg-1?d-1 灌胃。 （2）模型组：IDPN 溶于 0.9％生理盐水， 使其浓度为 100 mg?（0.1 mL）-1。
　　给予300 mg?kg-1 进行腹腔注射，每天 1 次，连续 7 天进行造模。 腹腔注射的同时给予生理盐水 20 mL?kg-1?d-1灌胃。
　　（3）泰必利组：IDPN 腹腔注射造模，方法同模型组。 腹腔注射时给予泰必利 25 mg?kg-1?d-1，以生理盐水按 20 mL?kg-1 配成混悬液灌胃治疗。
　　（4）复方中药组：IDPN 腹腔注射，方法同模型组。 14 味中药免煎剂温开水稀释，使每 1 mL 药液含生药 1g，腹腔注射的同时给予 20 mL?kg-1?d-1 灌胃。 以上 4 组灌胃均每天 1 次，连续 28 天。
　　1.2.2 点头次数测定： 小鼠单独放入笼底内径长 39cm、宽 26 cm、高 19 cm 的饲养笼中，适应环境 3 min后开始进行拍摄，观察小鼠 3 min 内的点头次数。 点头以颈部的上下运动为准，仅头部的轻微运动不计于内。
　　1.2.3 小鼠自主活动计数：参照文献的方法，应用小鼠自主活动程序自动控制仪测定小鼠自主活动计数。 温度 26 ℃，暗室，无噪音。 将小鼠放入直径为25 cm、高 12 cm 的活动箱中，每个活动箱中 1 只，加盖令其熟悉环境 3 min，3 min 后开始对活动情况进行自动计数，记录时间为 5 min。
　　1.2.4 统计学方法： 采用 SPSS 15.0 统计分析软件，数据采用具有重复测量的方差分析。
　　2、 结果
　　2.1
　　小鼠给予 IDPN 后的一般表现模型组、 复方中药组及泰必利组小鼠在前 3 天腹腔注射后行为未见明显差异； 从第 4 天开始可以观察到小鼠在受到刺激（如提出笼外、腹腔注射等）后，比空白组更容易出现直立、攀爬、悬挂、洗脸等各种特殊行为，安静后未见明显差异；第 7 天腹腔注射完毕后均出现不同程度的活动增多、嗅、舔、点头等行为，保持某一姿势不变的时间较空白组短，受刺激后活动愈加明显。
　　2.2
　　复方中药对 IDPN 模型小鼠点头次数的影响对各组小鼠腹腔注射
　　7 天后，模型组小鼠点头次数增多（P =0.03），复方中药组与泰必利组小鼠经 7 天灌胃治疗后较模型组头部运动并无减少（P =0.28，P =0.584）； 但灌胃 28 天再次测定模型组小鼠头部运动较空白组小鼠仍增多（P =0），但复方中药组与泰必利组小鼠的点头次数已明显较模型组小鼠减少（P =0），且复方中药组疗效稍优于泰必利组。
　　见表 1。
　　表 1 复方中药对 IDPN 模型小鼠点头次数的影响
　　（次，x±s）
　　组别
　　n
　　第7天
　　第28天
　　空白组
　　10
　　19.67±5.15
　　13.22±3.38
　　模型组
　　10
　　46.67±18.24*
　　25.78±5.72*
　　复方中药组
　　9
　　32.11±15.70
　　14.44±4.25△
　　泰必利组
　　10
　　36.56±9.04
　　16.78±7.92△
　　2.3
　　复方中药对 IDPN 模型小鼠自主活动的影响
　　第 7 天时模型组与空白组比较， 自主活动计数无增加（P =0.721），复方中药组、泰必利组与模型组比较，自主活动计数亦无增加（P =0.958，P =0.859）；第
　　28 天 亦 未 见 自 主 活 动 计 数 增 加 （P =0.842，P =0.137，P =0.742）。 见表 2。
　　表
　　2 复 方 中 药 对 IDPN 模 型 小 鼠 自 主 活 动 的 影 响 （次，x±s）
　　组别
　　n
　　第7天
　　第28天
　　空白组
　　10
　　19.67±5.15
　　13.22±3.38
　　模型组
　　10
　　46.67±18.24
　　25.78±5.72*
　　复方中药组
　　9
　　32.11±15.70
　　14.44±4.25△
　　泰必利组
　　10
　　36.56±9.04
　　16.78±7.92△
　　3、 讨论
　　以心理调适配合药物为主，但因西药口服剂量存在个体差异，根据患儿的情况不同需不断调整剂量，且较长时间维持治疗，加之诸多副作用，使患儿及家长难以接受。
　　而中医药以其治法丰富、简便廉验、副作小、疗效确切的优势受到越来越多的关注。 本实验所用中药依据小儿多发性抽动症病位在肝脾，病机责于脾虚肝旺的临床经验，以扶土抑木为法，选用经典方剂六君子汤合泻青丸加减而成。
　　本实验在前期工作的基础上，用 IDPN 腹腔注射诱导的以头部抽动为主的动物模型。 自主活动是反映动物随意运动和中枢神经系统兴奋程度的指标，动物在肌力受损或中枢神经系统兴奋性改变时，其自主活动次数都会发生改变。
　　实验中，模型组小鼠自主活动与空白组比较并无统计学差异。 点头次数除可反映小鼠自主运动外，还可表现小鼠的兴奋程度。 实验中腹腔注射第 7 天小鼠即出现点头次数增多， 灌胃 28 天后复方中药组与泰必利组小鼠的点头次数已明显较模型组小鼠下降，
　　且复方中药组疗效稍优于泰必利组。 综上可见，腹腔注射 IDPN 所诱导的拟多发性抽动症模型以头部运动过多为主，
　　也同时证明了 TS 需较长时间治疗， 疾病本身决定了治疗不可能一蹴而就，而且从长期疗效上来看，中药治疗比西药显示出更广阔的应用前景。
　　本研究同时提示，IDPN 诱导的动物模型在一定程度上模拟了多发性抽动症的某些临床表现（主要为头和颈部的动作过多）， 较以往使用的阿朴吗啡等诱导模型具有操作方法简便、复制成功率高、症状持续时间长的优点，更有利于中药药效学的研究。
　　至于复方中药对 TS 模型鼠的作用机制，尚需进一步的研究。