(一)培養和生化反應 部分支原體厭氧,在5%~10%CO2,80%~90%溼度條件下,生長較好,支原體細胞的主要成分膽固醇和蛋白質均來自培養基,後者需含血清、蛋黃等。菌落似煎蛋,一般菌落大,100-300nm,生長需7-14d,另一種,菌落10-25nm,生長快,僅24-48h,稱為T株,即解脲支原體。
(二)抗體和抗原檢測 肺炎支原體感染2周後,約50%產生抗體,紅細胞凝集試驗陽性,效價1:32以上,恢復期效價4倍增長明顯。40%~50%的病例鏈球菌MG凝集試驗為陽性。可通過補體結合試驗、間接血凝試驗、酶聯吸附試驗等進行補充檢測。此外,病變灌洗液可通過PCR檢測。此外,肺炎支原體中的RNA可以通過應用同位素標記的DNA,使用快速基因探針檢測系統來確定,與培養相比,符合率為89%。