1.鼓氣耳鏡檢查或顯微鏡檢查
鼓氣耳鏡檢查方便易行，是分泌性中耳炎的主要診斷方法，也是社區檢查鼓膜的首選方法。它可以改變外耳道的氣壓，觀察鼓膜的活動情況。如發現鼓膜動度減低，同時伴有鼓膜內陷、色澤由正常的灰白色半透明狀改變為橘黃色或琥珀色，見到氣液平面或氣泡即可診斷。與普通耳鏡相比較，鼓氣耳鏡有著更高的敏感度和特異度。
2.聲導抗測試
聲導抗測試是反映中耳功能的快速、有效的客觀測聽方法。由於鼓氣耳鏡對於2歲以下兒童的鼓膜和中耳情況判斷困難，聲導抗則提供了方便的測試。聲導抗的鼓室壓圖可呈B型和C型。開始時咽鼓管功能不良或堵塞，中耳氣體被吸收形成負壓，鼓膜內陷，鼓室壓峰壓點向負壓側位移，以C型曲線多見。當病變逐漸進展，鼓膜更加內陷，出現鼓室積液，傳音結構質量增加而使聲導抗進一步增加，鼓室勁度加大，鼓膜和聽骨鏈活動降低，峰壓點就越偏向負值，當聲順減弱或無變化時則成為無峰的B型圖。
一般認為，如鼓室導抗圖為B型，結合臨床可診斷為分泌性中耳炎。但是，新生兒和嬰兒出生後外耳和中耳結構發生了一系列的改變，如1歲以內嬰兒外耳道大小和直徑的增加，使其順應性也發生變化，導致外耳道共振增益和共振頻率發生改變;隨著生後6個月內鼓膜到鐙骨底板距離的增長，增加了中耳含氣腔，擴大了中耳腔的容積，此時乳突氣化也增加，中耳腔容積增加使鼓膜的順應性和控制低頻傳導方面受到重要影響。此外，中耳腔中存在的羊水和間葉細胞逐漸消失(可持續到生後5個月)，也使得中耳總質量減少;鐙骨密度降低，質量減少;聽骨鏈關節之間和鐙骨底板附著到卵圓窗上的緊密程度也在改變，這些都減少了抵抗成分。因此，常規的226Hz探測音測試的鼓室圖不能真實地反映6個月以內嬰幼兒中耳有無病變和中耳功能。因此大於 4個月患兒使用226HZ的探測音，小於4個月的患兒使用高頻率的探測音(1000Hz)。這樣可使檢查結果更加準確。
3.鼓膜穿刺或鼓膜切開術
在耳顯微鏡或內鏡下，於鼓膜前下方進行穿刺或切開，若有漿液樣或黏液樣液體流出則可證實分泌性中耳炎的存在。其為一種有創性診斷方式，但鼓膜穿刺術是臨床診斷中的金指標，不但可以明確診斷，同時可以達到治療目的。
4.鼻咽部檢查
成人患者，用鼻內鏡或多功能纖維鼻咽鏡直接觀察鼻咽部及咽鼓管咽口情況。排除鼻咽部佔位性病變。
5.顳骨高分辨率薄層CT
單側頑固性分泌性中耳炎，經過治療無效，應警惕黏膜下型鼻咽癌累及咽旁間隙，壓迫咽鼓管。如鑑別診斷需要，或需要排除鼻咽部和咽旁間隙佔位者，顳骨高分辨率薄層CT可瞭解中耳情況，將CT片調到軟組織窗時可觀察咽旁間隙有無佔位。必要時需進行增強掃描。
