檢測HIV感染者體液中病毒抗原和抗體的方法,操作方便,易於普及應用,其中抗體檢測尤普通。但HIv P24抗原和病毒基因的測定,在HIV感染檢測中的地位和重要性也日益受到重視。
抗體檢測
主要有酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和免疫熒光試驗(IFA)。ELISA用去汙劑裂解HIV或感染細胞液提取物作抗原,IFA用感染細胞塗片作抗原進行抗體檢測,如果發現陽性標本應重複一次。為防止假陽性,可做Western blotting (WB,蛋白印跡法)進一步確證。
WB法是用聚丙烯酰胺凝膠電泳把HIV蛋白進行分離,再經傳移電泳把不同蛋白條帶轉移於硝酸纖維膜上,加入病人血清孵育後,用抗人球蛋白酶標抗體染色,就能測出針對不同結構蛋白抗體,如抗gp120、gp41、P24抗體,特異性較高。
HIV抗體檢測結果有兩種可能,HIV陽性或HIV陰性。
HIV陰性說明從人體內檢測不到HIV抗體,陰性符號以(-)表示。不能說沒有感染HIV, 要看是甚麼時候檢測的,在窗口期內,感染者的體內還沒有產生HIV抗體,或還沒有產生足量的HIV抗體,這時HIV檢測是陰性結果,如果在窗口期之後檢測的,可以排除感染HIV的可能。
HIV陽性說明從人體內檢測到了HIV抗體,陽性符號以(+)表示
檢測結果不定因素感染還處於窗口期:從HIV進入體內到檢測這段時間還不夠長,因此血清還沒有形成典型的抗體反應
艾滋病進展到終末期,抗體水平下降
其他非病毒蛋白抗體的交叉反應:自身免疫性疾病、某些惡性疾病、懷孕、輸血或器官移植等情況下,身體可以產生一些抗體,其反應與HIVP24核心蛋白抗體引起的反應很相似
抗原檢測
HIV-1 P24抗原檢測可用於HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷;HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑑別診斷;第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性,但HIV-1抗體確認陰性者的輔助診斷。P24抗原檢測一般用ELISA雙抗體夾心法試劑,試劑必須經過SDA批准註冊、在有效期內,其陽性結果必須依據試劑說明書經中和試驗確認。HIV-1P24抗原檢測的敏感性為30-90%,該結果僅作為HIV感染的輔助診斷依據,不能據此確診;HIV-1 P24抗原檢測陰性只表示在本試驗中無反應,不能排除HIV感染,臨床中一般不作為常規診斷項目。
核酸檢測
HIV核酸檢測可用於HIV感染的輔助診斷、病程監控、指導治療方案及療效判定、預測疾病進展等。常用的HIV病毒載量檢測方法包括逆轉錄PCR實驗(RT-PCR)、核酸序列擴增實驗(NASBA)、分支DNA雜交實驗(bDNA)以及實時熒光定量PCR技術。值得注意的是,每一種HIVRNA定量系統都有其最低檢測限,即可以測出的最低拷貝數或國際單位,RNA定量檢測時未測出不等於樣品中不含有病毒RNA,因此HIV核酸定性檢測陰性,只可報告本次實驗結果陰性,但不能排除HIV感染;HIV核酸檢測陽性,可作為診斷HIV感染的輔助指標,不能單獨用於HIV感染的診斷。報告HIV核酸定量檢測結果時應按照儀器讀數報告結果,註明使用的實驗方法、樣品種類和樣品量,當測定結果小於最低檢測限時,應註明最低檢測限水平。
HIV核酸定性檢測也可用於HIV感染的輔助診斷,在分析HIV基因亞型和變異等基礎研究中應用。通常使用PCR或RT-PCR技術,使用分子生物學實驗室通用的擴增試劑,引物可來自文獻或自行設計,應儘量覆蓋所有或常見的毒株,也可使用複合引物。報告定性檢測結果時應註明反應條件和所使用的引物序列。此外,利用核酸檢測方法的高度敏感性,使用集合核酸擴增檢測技術和方法,對高度懷疑感染人群且抗體陰性的樣品進行集合核酸檢測,可及時發現窗口期感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測具有更高的成本效益。