一、傳統雜交法
特異度高、直觀等優點,但操作複雜,靈敏度較PCR法低,而且需要新鮮組織樣本,不便於臨床推廣。
二、雜交捕獲法
由美國Digene公司生產的第二代雜交捕獲法Hybrid CaptureⅡSystems(HC2)是一種液相雜交法,是目前唯一被美國食品藥品監督管理局批准的HPV DNA檢測技術,它能同時檢測出13種高危型型病毒(HPVl6、18、3l、33、35、39、45、5l、52、56、58、59、68)和5種低危型病毒(6、ll、42、43、44)。雖然美國CDC批准了HC2檢測低危型,但目前國內的試劑只能檢測高危型。HC2高危型檢測靈敏度較好、重複性高,但其缺點在於不能確定具體HPV亞型,且檢測成本昂貴,在經濟欠發達地區很難推廣。另外,HC2還存在一定的交叉雜交的問題,有時會引起假陽性結果。
HC2檢測是目前臨床高危型HPV檢測領域很重要,很常用的方法,也是宮頸癌篩查的首選方法。HC2統一的臨床判定標準≥1.0pg/ml(相當於5000病毒拷貝/次)。需要特別指出,HC2 HPVDNA檢測結果陰性並不代表完全沒有感染HPV,只是代表其體內HPV含量低於5000拷貝/次。病毒含量低於該水平,則在至少3-5年內發生宮頸上皮瘤變CIN2/3級病變的可能性是非常低的。也就是說,罹患宮頸癌的風險是非常低的。若檢測結果為陽性, HC2 HPV DNA≥ 1.0pg/ml(5000copies/ml),則應當每年定期進行HC2複查,若連續兩年檢測結果陽性,應諮詢醫生進行下一步檢查或治療,年齡大於30歲女性更應密切監測。宮頸癌手術後的病人監測HC2可預測病變惡化或手術後復發的風險。
三、PCR法
以PCR為基礎的檢測方法是目前認為較好的HPV DNA檢測及分型方法,主要分為基因擴增和產物分析兩部分。它能用於HPV定性及半定量檢測、DNA測序和基因突變分析。
1.PCR基因擴增
包括通用引物PCR(GP-PCR)、型特異性PCR(TS-PCR)和實時熒光定量PCR(RQ-PCR)等方法。
2.PCR產物分析
包括基因芯片(也稱DNA芯片)法、限制性片段長度多態性分析(RFLP)、測序法和雜交分析法等。基因芯片法可進行HPV分型及診斷混合感染,且具有通量大、高敏感性和特異性的特點,可用於大範圍篩查,更適於流行病學的調查和疫苗方面的研究。
男性檢測HPV也是有重要意義的,研究顯示有多個性伴侶的男性是高危型和低危型HPV的“運載工具”。男性感染高危型HPV主要是亞臨床感染。以往檢測男性HPV感染是通過陰莖灌洗液或精液檢測HPV DNA,但存在取材的困難、檢測手段的敏感性低、實驗程序複雜,缺乏正常對照等缺點。
目前臨床上對於HPV的檢測還沒有既能分型又能定量,既非常準確又價格便宜的方法,為了解決這個問題,一是根據不同的目的進行不同的檢測,一是傾向於聯合應用,例如,液基細胞學檢測(TCT)聯合細胞HC2檢測、或者基因芯片進行篩查後,進行HC2半定量檢測等。另外,性伴同時進行檢測,無論對HPV低危型引起的尖銳溼疣,還是HPV高危型引起的宮頸癌等疾病,都有重要意義。