仪器设备
1、 医用微波炉;
2、 水浴锅;
3、荧光显微镜;
4、数字显微照相机。
FISH试剂
(1)1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成，储存于4℃;
(2)20×SSC(pH7.0);
(3)2×SSC，由20×SSC溶液稀释而成;
(4)25mg/ml蛋白酶K消化液。
(5)变性液(70%甲酰胺+2×SSC，pH7.0)：4ml 20×SSC;8ml蒸馏水;28ml甲酰胺。每次新鲜配制。
(6)杂交后洗涤液： 20×SSC 4ml;蒸馏水16ml;甲酰胺20ml。每次新鲜配制。调节pH前升至室温。(7)封闭液I：体积分数5% BSA 3 mL，20×SSC 1 mL，ddH2O 1mL，Tween20 5 μL混合。
(8)封闭液II：体积分数5% BSA 3mL，20×SSC 1mL，goat serum 250 μL，ddH2O 750 μL，Tween20 5 μL混合。
(9)荧光检测试剂稀释液：体积分数5% BSA 1mL，20×SSC 1mL，ddH2O 3mL，Tween20 5μL混合。
实验步骤
1、脱蜡：
1)二甲苯脱蜡3次，每次5min;
2)100%酒精两次，每次2min;
3)移出酒精，斜置切片，标记末段向下，空气干燥。
2、蛋白酶处理:
1)每个染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配制方法如下：2×SSC 40ml倒人Facal管，在水浴槽中预热。将消化酶液加入管内，摇动直到酶溶解。
2) 37℃水浴槽中预热染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20min。
3) ×SSC在室温下漂洗切片3次，每次1min。
4)梯度酒精脱水(-20℃预冷)。
3、变性：
1)每一个立式染色缸配制40ml变性溶液;
2)78℃水浴槽中平衡预热混合液染色缸;
3)78℃孵育8min;
4) 即移入-20℃预冷70%酒精的染色缸内2min，再依次移入80%、90%和100%的-20℃预冷酒精内，每缸2min;
5)空气干燥。
4、杂交：
1)准备探针;
2)取一个较大的湿盒，交叉放置切片;
3)滴10μl探针在切片的组织上，加盖玻片;
4)盖上湿盒盖，37℃孵育12h～16h。
杂交后的水洗：
5)镊子小心去除盖玻片;
6)43℃预热杂交后水洗溶液40ml水洗切片15min;
7)2×SSC(37℃)洗两次，每次10min;
8)切片放人染色缸的1×PBS内待检测，勿使切片干燥。
检测：
9)从1×PBS中取出切片，除去过多的水分，避免标本干燥。把切片放入湿盒内，同时处理4张切片。
10)每张切片使用30μl～60μl罗丹明抗-地高辛抗体或FITC卵白素，室温下孵育20min;
11)去掉塑料盖膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2min。
12)从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出;
13)每张切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20min;
14)去掉塑料盖膜，把切片放人含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2min;
15)从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出;
16)每张切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20min;
17)1×PBS室温下洗3次，每次2min。
5、细胞核染色：
1)张切片加10μl～20μl DAPI，覆盖盖玻片并在室温下孵育2～5ml;
2)尽可能快的在荧光显微镜下观察或封闭盒内保存在-20℃冰箱。切片在染色之后1h内可以在显微镜下观察。
6. 荧光显微镜观察FISH结果
先在可见光源下找到具有细胞分裂相的视野，然后打开荧光激发光源，FITC的激发波长为490 nm。细胞被PI染成红色，而经FITC标记的探针所在的位置发出绿色荧光。
