1.(血、膿液、痰、腦脊液、糞便、分泌物等)的塗片或培養找到病原菌。
2. 敗血症和心內膜炎的確診在於相應臨床表現和陽性血培養。疑為兩者時宜在抗菌藥物應用前取血3～4次送培養，每次相隔1～2小時已用抗菌藥物者仍須在每天高熱時取血培養2～3次，血量可在6～10ml，最好血清留血塊作培養。3～4次培養的陽性率則可達95%～98%以上。此係指抗菌藥物應用前而言，如已應用抗菌藥物，則培養陽性率將自90%以上降至40%左右。血培養陰性而從各種膿性分泌物(如遷徙性膿腫、手術創口膿液等)，胸腔積液、腹水等標本檢出病原菌也有輔助診斷價值。
3.表葡菌血培養陽性判斷時宜謹慎，如2次以上獲得同一表葡菌，雖對診斷有一定的幫助，但有條件的實驗室應作質粒和限制酶切譜的分析。
4. 腦膜炎患者的腦脊液，肺炎患者的痰液，中毒性休克綜合徵患者的月經塞上和局部膿腫、陰道等處，骨髓炎患者的局部分泌物，食物中毒患者的糞便和嘔吐物(以及相應食物)等中均有分離出致病菌的機會。當臨床上高度懷疑為金葡菌敗血症或心內膜炎，而血培養多次呈陰性時則可作血清磷壁酸抗體檢測(固相放射免疫或酶聯免疫吸附試驗)。
5.椎旁膿腫，X線檢查從2～3周開始可見椎間隙狹窄，以後有骨質破壞及增生，椎間盤有骨橋形成，為該病X線的特徵。
葡萄球菌感染的診斷主要依靠各種不同部位感染的臨床表現和有關標本(血、膿液、痰、腦脊液、糞便、分泌物等)的塗片或培養找到病原菌。癤、癰、膿皰瘡、瞼腺炎、毛囊炎、甲溝炎等皮膚軟組織感染易於辨認，一般不會造成誤診。
