1.組織病理學檢查 是診斷此病的可靠方法，從活動性損害的邊緣取材，HE染色可見表皮有角化不全、顆粒層消失、棘層肥厚、海綿形成和假性上皮瘤樣增生。損害中心區可有萎縮和(或)潰瘍形成。在棘層肥厚區有多形核白細胞外移，形成灶性的小膿腫。較有特徵性的組織學變化為真皮乳頭和真皮上部可見瀰漫性和高密度的細胞浸潤、水腫、豐富的脈管和血管內皮增生。浸潤細胞包括較多的漿細胞、組織細胞、不等量的紅細胞外溢，有時有淋巴細胞及上皮樣細胞或朗漢斯鉅細胞。最具特徵性的是，用Giemsa染色能識別出增大的組織細胞(20～90μm)，其內有多個分隔空間，每個空間有1～20個杜諾凡小體，小體1～2μm大小，呈藍黑色，似別針狀。
2.細胞學檢查 從活檢組織取大約1mm3的碎片，置於兩塊載玻片中夾緊，向正反方向旋轉，製成細胞壓片。壓片在空氣中乾燥後用甲醇固定，做Giemsa染色。鏡下可見單一核細胞內的杜諾凡小體(有時也可見於細胞外)。
3.細菌培養 將上述用載玻片得到的組織碎片加滅菌鹽水乳化，接種到5日齡的雞胚卵黃囊中，在37℃下培育72h，肉芽腫莢膜桿菌將在卵黃囊液中生長。經染色可顯示別針狀的病原體。
4.血清學檢查 尚無實用的血清學方法。用補體結合試驗只能在有3個月以上病期病損的患者血清中檢測到有意義滴度的抗體，且與肺炎克雷白桿菌及鼻硬結克雷白桿菌有交叉反應。
組織病理：損害中心部為潰瘍，邊緣呈棘層增厚或假上皮瘤樣增生。潰瘍邊緣表皮有假上皮瘤樣增生，棘層肥厚，釘突延長。真皮有致密的組織細胞、漿細胞和少量淋巴細胞浸潤，間有多形核白細胞微膿腫。用Gram染色，在損害中可見散在的組織細胞，胞質呈多囊分隔空泡狀，其中有1～20個，1～2μm直徑卵圓形小體(Donovan小體)，有診斷價值。
