發布於 2022-12-09 04:42

  【關鍵詞】 多發性抽動症,六君子湯合瀉青丸,亞氨基二丙腈,行為學小兒多發性抽動症又稱 Tourette 綜合徵(Tourette syndrome,TS),主要發生在兒童和青少年時期,是以反覆、迅速、突發、刻板的運動和發聲抽動為主的神經精神障礙,臨床常表現為擠眉、眨眼、咧嘴、聳肩、仰頸、扭肩、吭吭,甚至踢腿、跺腳等。
  治療多使用抗精神病類藥物多巴胺受體阻製劑 (如氟哌啶醇、泰必利等)以及 α2 受體激動劑(如可樂定)。本研究通過擬 TS 小鼠模型的行為學改變, 對六君子湯合瀉青丸與泰必利進行藥效學比較,為複方中藥的臨床應用提供實驗學依據。
  1、 材料與方法
  1.1 實驗材料
  1.1.1 實驗動物:ICR 小鼠,40 只,雄性,體重(18±2)g。由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供 ,SPF級,合格證號:SCXK(京)2007-0001。
  基礎飼料為實驗鼠全價顆粒飼料,自由飲水,飼養溫度(22±2)℃,溼度 50 %~55 %,飼養 1 周後無異常供實驗用。
  1.1.2 試劑與儀器:(1)試劑:亞氨基二丙腈(IDPN)100mL,購自美國
  Sigma 公司。 (2)儀器:ZIL-2 小鼠自主活動程序自動控制儀,
  中國醫學科學院藥物研究所研製;SONY HDR-XR100E 攝像機。
  1.1.3 實驗藥物:(1)六君子湯合瀉青丸加味:中藥均為免煎顆粒,其中太子參 10 g、炒白朮 10 g、茯苓 10
  g、陳皮 6 g、法半夏 6 g、防風 6 g、當歸 10 g、鉤藤 10 g、青礞石 10 g 為江蘇天江藥業有限公司生產,羌活 10 g、酒大黃 10 g、川芎 6g 、梔子 10 g、龍膽草 6 g 為廣東一方製藥有限公司生產,所有中藥均在北京中醫藥大學東方醫院購買。 (2)泰必利(鹽酸硫必利):江蘇天士力帝益藥業有限公司生產國藥準字 H32025477。
  1.2
  實驗方法
  1.2.1 IDPN 小鼠模型的建立及分組:40 只小鼠隨機分為 4 組,每組 10 只,參照 Bruce
  等[1]的方法建立模型。 (1)空白組:腹腔注射 0.9 %生理鹽水,每隻 0.3mL,每天 1 次,連續 7 天;腹腔注射的同時給予生理鹽水 20 mL?kg-1?d-1 灌胃。 (2)模型組:IDPN 溶於 0.9%生理鹽水, 使其濃度為 100 mg?(0.1 mL)-1。
  給予300 mg?kg-1 進行腹腔注射,每天 1 次,連續 7 天進行造模。 腹腔注射的同時給予生理鹽水 20 mL?kg-1?d-1灌胃。
  (3)泰必利組:IDPN 腹腔注射造模,方法同模型組。 腹腔注射時給予泰必利 25 mg?kg-1?d-1,以生理鹽水按 20 mL?kg-1 配成混懸液灌胃治療。
  (4)複方中藥組:IDPN 腹腔注射,方法同模型組。 14 味中藥免煎劑溫開水稀釋,使每 1 mL 藥液含生藥 1g,腹腔注射的同時給予 20 mL?kg-1?d-1 灌胃。 以上 4 組灌胃均每天 1 次,連續 28 天。
  1.2.2 點頭次數測定: 小鼠單獨放入籠底內徑長 39cm、寬 26 cm、高 19 cm 的飼養籠中,適應環境 3 min後開始進行拍攝,觀察小鼠 3 min 內的點頭次數。 點頭以頸部的上下運動為準,僅頭部的輕微運動不計於內。
  1.2.3 小鼠自主活動計數:參照文獻的方法,應用小鼠自主活動程序自動控制儀測定小鼠自主活動計數。 溫度 26 ℃,暗室,無噪音。 將小鼠放入直徑為25 cm、高 12 cm 的活動箱中,每個活動箱中 1 只,加蓋令其熟悉環境 3 min,3 min 後開始對活動情況進行自動計數,記錄時間為 5 min。
  1.2.4 統計學方法: 採用 SPSS 15.0 統計分析軟件,數據採用具有重複測量的方差分析。
  2、 結果
  2.1
  小鼠給予 IDPN 後的一般表現模型組、 複方中藥組及泰必利組小鼠在前 3 天腹腔注射後行為未見明顯差異; 從第 4 天開始可以觀察到小鼠在受到刺激(如提出籠外、腹腔注射等)後,比空白組更容易出現直立、攀爬、懸掛、洗臉等各種特殊行為,安靜後未見明顯差異;第 7 天腹腔注射完畢後均出現不同程度的活動增多、嗅、舔、點頭等行為,保持某一姿勢不變的時間較空白組短,受刺激後活動愈加明顯。
  2.2
  複方中藥對 IDPN 模型小鼠點頭次數的影響對各組小鼠腹腔注射
  7 天后,模型組小鼠點頭次數增多(P =0.03),複方中藥組與泰必利組小鼠經 7 天灌胃治療後較模型組頭部運動並無減少(P =0.28,P =0.584); 但灌胃 28 天再次測定模型組小鼠頭部運動較空白組小鼠仍增多(P =0),但複方中藥組與泰必利組小鼠的點頭次數已明顯較模型組小鼠減少(P =0),且複方中藥組療效稍優於泰必利組。
  見表 1。
  表 1 複方中藥對 IDPN 模型小鼠點頭次數的影響
  (次,x±s)
  組別
  n
  第7天
  第28天
  空白組
  10
  19.67±5.15
  13.22±3.38
  模型組
  10
  46.67±18.24*
  25.78±5.72*
  複方中藥組
  9
  32.11±15.70
  14.44±4.25△
  泰必利組
  10
  36.56±9.04
  16.78±7.92△
  2.3
  複方中藥對 IDPN 模型小鼠自主活動的影響
  第 7 天時模型組與空白組比較, 自主活動計數無增加(P =0.721),複方中藥組、泰必利組與模型組比較,自主活動計數亦無增加(P =0.958,P =0.859);第
  28 天 亦 未 見 自 主 活 動 計 數 增 加 (P =0.842,P =0.137,P =0.742)。 見表 2。
  表
  2 復 方 中 藥 對 IDPN 模 型 小 鼠 自 主 活 動 的 影 響 (次,x±s)
  組別
  n
  第7天
  第28天
  空白組
  10
  19.67±5.15
  13.22±3.38
  模型組
  10
  46.67±18.24
  25.78±5.72*
  複方中藥組
  9
  32.11±15.70
  14.44±4.25△
  泰必利組
  10
  36.56±9.04
  16.78±7.92△
  3、 討論
  以心理調適配合藥物為主,但因西藥口服劑量存在個體差異,根據患兒的情況不同需不斷調整劑量,且較長時間維持治療,加之諸多副作用,使患兒及家長難以接受。
  而中醫藥以其治法豐富、簡便廉驗、副作小、療效確切的優勢受到越來越多的關注。 本實驗所用中藥依據小兒多發性抽動症病位在肝脾,病機責於脾虛肝旺的臨床經驗,以扶土抑木為法,選用經典方劑六君子湯合瀉青丸加減而成。
  本實驗在前期工作的基礎上,用 IDPN 腹腔注射誘導的以頭部抽動為主的動物模型。 自主活動是反映動物隨意運動和中樞神經系統興奮程度的指標,動物在肌力受損或中樞神經系統興奮性改變時,其自主活動次數都會發生改變。
  實驗中,模型組小鼠自主活動與空白組比較並無統計學差異。 點頭次數除可反映小鼠自主運動外,還可表現小鼠的興奮程度。 實驗中腹腔注射第 7 天小鼠即出現點頭次數增多, 灌胃 28 天后複方中藥組與泰必利組小鼠的點頭次數已明顯較模型組小鼠下降,
  且複方中藥組療效稍優於泰必利組。 綜上可見,腹腔注射 IDPN 所誘導的擬多發性抽動症模型以頭部運動過多為主,
  也同時證明了 TS 需較長時間治療, 疾病本身決定了治療不可能一蹴而就,而且從長期療效上來看,中藥治療比西藥顯示出更廣闊的應用前景。
  本研究同時提示,IDPN 誘導的動物模型在一定程度上模擬了多發性抽動症的某些臨床表現(主要為頭和頸部的動作過多), 較以往使用的阿樸嗎啡等誘導模型具有操作方法簡便、複製成功率高、症狀持續時間長的優點,更有利於中藥藥效學的研究。
  至於複方中藥對 TS 模型鼠的作用機制,尚需進一步的研究。

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