1.雌激素試驗 孕激素試驗陰性者可以行雌激素試驗，以確定孕激素試驗陰性原因是否為雌激素水平低下。
方法：口服己烯雌酚1mg/d，共20天，停藥後陰道出血為Ⅱ度閉經，表明體內雌激素水平低下。其病因在卵巢、垂體或下丘腦功能不良。若做GnRH垂體興奮試驗後陰道無出血，則可明確子宮性閉經。
2.孕激素試驗 判斷卵巢有無雌激素分泌可行孕激素試驗。
方法：每天肌肉注射黃體酮20mg，用3天，或每天肌內注射10mg，用5天;亦可每天口服甲地孕酮5mg，用5天。
若停藥後3～7天出現陰道出血，表明該婦女體內有一定的雌激素，為Ⅰ度閉經;若無出血則為陰性，可能因為體內雌激素水平極低、子宮內膜增生不良，子宮內膜被破壞或缺如(如嚴重子宮內膜結核病、宮腔粘連或幼稚型子宮等)。
3、FSH、LH、PRL測定 適當時測定血中的各種激素水平，可獲得卵巢的功能狀態及其影響環節等方面較多的信息，檢測血清中FSH、LH、PRL、E2可以鑑別卵巢或垂體性排卵障礙於閉經。如確定卵巢是否已喪失分泌雌激素的能力，或因缺乏促性腺激素而卵巢不分泌甾體激素。用放射免疫法測定促性腺激素，按血清FSH、LH、PRL、E2值來鑑別卵巢或垂體性排卵障礙與閉經(表1)。
