微生物發酵複方中藥湯劑的遠大意義與前景瞻望
一、中藥發酵的歷史
1、歷史
我國古代人們非常有智慧，早在三千多年以前就開始將發酵法應用於中藥炮製中 。傳統中藥如：六神曲、淡豆豉、半夏曲、紅曲、沉香曲，豆黃等，均是通過利用自然界的微生物固體發酵後而形成的藥物。如半夏曲的製造，《本草綱目》記載：“半夏研末，以薑汁、白礬湯和作餅，楮葉包置籃中，待生黃衣，曬乾用。”其性味苦辛、平，能祛痰止咳、消食積、治洩瀉[1]，半夏本身具有一定的毒性，經過發酵後其原有的功效加強，而毒性卻大大降低。淡豆豉的發酵是“用黑大豆二三鬥，水浸一宿，瀝乾黃熟，攤席上… … 蒿覆，侯黃衣上遍……安甕中築實，桑葉蓋厚三寸，密封泥… …如此七次”而成，性味苦寒，具有解表除煩、宣鬱解毒功能。豆黃也用黑大豆發酵製成，“用黑大豆一斗。黃熟，鋪席上以蒿覆之，如氽醬法，待上黃取出曬乾 ”。其性味甘溫，能祛溼癢、健脾益氣。未經發酵的黑大豆，則性味苦平，有活血、利水、解毒作用。從上述可以看，這種傳統發酵方法是將藥材與輔料混和，在常溫常壓的自然條件下，利用自然存在的微生物發酵而成，其結果是提高了藥效、改變了藥性，降低了毒副作用，甚至有新的功效產生。這種傳統的發酵方法沿用至今，經久不衰。
現代用發酵法炮製單味中藥，有了很多進展，不但對固體發酵而且對液體發酵也有許多研究，結果發現發酵前後無論是其本身的成分或是原有的功能都發生了的很大變化，這和古代傳統發酵方法的結果是一致的。甚至發現更有價值的功效，如抗癌等。
固體發酵中如對五倍子，大黃，黃芪等的發酵。研究發現五倍子發酵後其澀腸止瀉功能大大加強，同時產生沒食子酸，產生抗菌，抗病毒，抗真菌，抗腫瘤，抗過敏及利膽和支氣管擴張等新的藥理作用。而未發酵的五倍子卻沒有這些作用[2] 。戴萬生 等用發酵法炮製大黃，改變了大黃有效成分中蒽醌類的含量。經酵母發酵後發現較傳統方法發酵法保存了更多的大黃葸醌，並使有瀉下作用的結合類蒽醌含量降低，在臨床應用上緩和了大黃峻烈的瀉下作用及對胃腸道的不良反應；同時作為抗菌、抗腫瘤的主要有效成分的遊離型葸醌的含量增加了6倍左右，擴展了其應用範圍[3] 。香港中醫吳志勇博士與內地教授林陸山合作。運用生物技術發酵黃芪獲得成功。使藥效大大提高，發酵黃芪所含的黃芪多精最多為傳統工藝的5倍，且動物實驗證明發酵黃芪的用量為傳統方法制成的用量減少了28倍，即可產生相同的藥效[4]。喜樹鹼具有較強的抗腫瘤活性，同時又具有嚴重的胃腸毒性，如抑制骨髓功能和引起出血性膀胱炎等，制約了它在臨床的進一步應用，10一羥基喜樹鹼是喜樹鹼的結構類似物，對多種癌症具有顯著的療效，且毒副作用很小，採用無毒黃麴黴菌株將喜樹鹼轉化為10一羥基喜樹鹼，轉化率達50％ 以上。使喜樹鹼對胃腸毒性大大減少[5]。雲南大學與昆明植物研究所李國紅等人聯合採用枯草芽孢桿菌對三七根進行發酵後。在對其中的皂苷成分的研究中發現，從發酵後的三七中分離到了人參皂苷RH4 。這種化合物未在發酵前檢測到。說明這種化合物是通過發酵產生的，可能是在發酵的過程中。三七鬚根的某些皂苷成分被微生物轉化為人參皂苷[6]。液體發酵中如金建明等[7]利用龍舌蘭發酵後，從發酵液中分離得到了一種新的化合物一一龍舌蘭苷C……王林等人用麻黃、萊菔子 、金銀花、連翹四味中藥發酵靈芝菌，發現這四味 中藥對靈芝菌的生物量有明顯的促進和增加作用，且使靈芝發酵液的止咳、去痰作用高於其與中藥混合發酵前[8]。王峰 等在雞腿蘑的發酵培養基中添加了毒性低、藥食兩用的中藥材進行研究，結果顯示添加苦瓜後的發酵液具有明顯的降血糖功效[9]。
綜上所述，無論是固體的或是液體的單味中藥，經過發酵後其成分，功效等都有很多變化。這可能是由於微生物具有非常強大的分解轉化物質的能力，和能產生豐富的次生代謝產物。在其新陳代謝和生長繁殖中將中藥分解各式各樣的有機物質。從而產生新的藥效。由此可見，此發酵方法比一般的物理或化學的炮製手段更大幅度地增強和調整藥性，提高療效，降低毒副作用，擴大適應症。單味中藥經過發酵後有如此強大的變化，那麼複方中藥湯劑本身在煎，浸的過程會產生很複雜的變化，如果再經過發酵的話會有怎樣的結果呢？已經有人做了這樣的研究。
二、複方中藥發酵的現況
（1）國內現況
複方中藥湯劑發酵的研究我國從80年代就已開始，但至今發展依然緩慢，有關報道也不多見，應用於臨床和社會的則更少，但已有的研究成果帶來的經濟效益和社會效益卻非常的大。如片仔癀，已成為國家保護的傳統中藥。三株口服液作為有益消化道健康的保健品深受消費者的歡迎。康復靈，作為抗腫瘤藥臨床應用很廣。
片仔癀即是用麝香、牛黃、蛇膽、三七等名貴中藥的微生物發酵物，為臨床退黃、消腫的良藥；三株口服液屬營養保健食品，它以大豆芽為原料，在牛肉湯、大豆芽浸液、酵母膏、蔗糖、葡萄糖中加入雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌和DL菌聯合發酵製成，產品有益於保持胃腸道健康。“康復靈”為抗癌驗方[10]，主要成分有靈芝發酵菌、黨參、麥冬、豬苓、薏苡仁、淮山藥等，經生物發酵轉化後多數樣品具有抑制小鼠肉瘤生長的作用。
其他僅見有對六味地黃煎劑，玉屏風散煎劑發酵的臨床報道。如董枚，郭芳[11 ]等報道，將傳統方六味地黃湯發酵，其發酵液對小鼠肝癌具有顯著的抑制作用，六味地黃髮酵液0.3 g／kg連續給藥兩週，可顯著抑制小鼠肝癌H22的生長，抑瘤率為3O％ ，而同等劑量的六味地黃煎劑無明顯的抑瘤作用。而且，六味地黃髮酵液和六味地黃煎劑對環磷酰胺造成的小鼠骨髓抑制，均有升高外周血白細胞的作用，六味地黃煎劑組及發酵液組的白細胞數較模型對照組顯著升高（P< 0.01），且六味地黃髮酵液組的白細胞數比煎劑組多（P< 0.01）。在免疫調節方面，六味地黃髮酵液的功效明顯優於六味地黃煎劑[12]。具體表現為，六味地黃髮酵液給小鼠灌胃給藥300 mg／kg，每日1次，連續給藥兩週後，六味地黃髮酵液較六味地黃煎劑對遲發變態反應明顯增強（P< 0.05），半數溶血值明顯升高（P< 0.05）。說明發酵液在增強小鼠的細胞免疫和體液免疫功能上明顯優於六味地黃煎劑（p< 0.01）8。
徐啟華[13]等對中藥複方玉屏風散煎劑進行發酵，結果玉屏風散發酵液對小鼠的免疫功能增強，療效要強於玉屏風散煎劑。楊海龍等[14]取黃芪等10味中藥各15 g，製成水提液後，研究其對靈芝液體發酵生物量及胞外多糖的影響，結果可見，在每升培養基為187.5 g生藥量的劑量下，除黃芪外，薏苡仁、枸杞子、當歸、玄參、山藥、黨參、牛膝、石斛和蘆薈的水提液均能促進靈芝的生長（生物量增加），以牛膝、山藥效果顯著，生物量分別為對照的2.35倍和2.12倍。
由此可知，複方中藥湯劑經過發酵後也有許多好的功效出現，那麼是否能對人體有毒副作用呢？有人對此專門作了研究。韓春楊等人採用具有免疫增強和促生長作用的中藥複方製劑由黃芪、黨參、茯苓、甘草、神曲、麥芽和山楂組成的發酵液，並對該製劑的毒理學作用進行了研究，以評價其安全性。通過對小鼠半數致死量進行測定，在給藥的當日，小鼠活動、精神狀態、飲食正常，1周之內未見小鼠死亡及其他異常發生，處死後屍檢觀察各鼠心、肝、脾、肺、腎未發現任何異常改變 。 對小鼠最大耐受量也進行了測定。結果表明，小鼠精神、食慾、活動與對照組相比均未見異常變化，內臟器官未見任何異常。因此可以認定該製劑在短期內使用安全，毒性級別應屬於“實際無毒級”，是一種比較安全的製劑[15]。
（2）國外現況
國外對於中藥發酵的研究報道較少。上世紀90年代初，日本人小橋恭一發現中草藥成分如番瀉苷，可藉助腸道細菌轉化為致瀉有效成分而起到治療作用。又有苷類、黃酮類、香豆素類等中藥活性成分通過腸道細菌進行化學修飾而實現生物轉化的相關報道。[16]日本人，用Bacillus菌發酵大豆，因為Bacillus菌酶系豐富，包括澱粉酶、纖維素酶和蛋白酶，且能增加維生素K含lus subtilis菌環能消除小腸內致病菌，其提取物具有明顯的抗癌活性和降壓作用6
韓國近年來很熱衷於發酵草藥的研究
三、複方中藥湯劑發酵的優點
（1）中藥原有的活性成分得以保存
微生物發酵是在常溫、常壓等條件下進行的生物轉化，故能最大限度地保護中藥中活性成分免遭破壞。
（2）更有利於有效成分的吸收和利用，減輕腸胃負擔。
微生物在發酵的過程中，藥物進入人體後不能直接被利用的大分子有效活性成分，通過微生物將其降解成小分子活性物質而被直接利用，大大提高中藥的藥效。小分子活性物質由於其更易於通過血腦屏障而與人體細胞蛋白結合，因而比大分子物質有更高的活性。發酵後中藥的分子量較小，因而具有在人體中吸收較快、較完全、治療效果更好等特性。如大豆異黃酮主要以9種異黃酮糖苷和3種相應的配糖體組成，經腸道微生物作用，部分糖苷脫離釋放出遊離式的二羥基異黃酮（大豆苷元）和三羥基異黃酮（染料木黃酮），這兩種異黃酮可以被機體有效吸收 J。
（3） 產生新的功效，擴大適應症範圍。
由於微生物在生長過程中會產生各種各樣的酶，如纖維素酶、木質素酶、澱粉酶、蛋白酶、脂酶等。這些豐富而強大的酶系可以將中藥的成分分解轉化形成新的活性成分，產生新的藥效，而且微生物在中藥的特殊環境生長過程中本身還能產生豐富的次生代謝產物，有些次生代謝產物自身就是功效良好的藥物；微生物的次生代謝產物和中藥中的某些物質發生化學反應生成新的化合物，從而形成新的活性成分或改變各活性成分的含量，因此具有新的治療、預防和保健功能。
（4）降低本身藥物具有的毒副作用和減少重金屬，農藥，抗生素等汙染成分
微生物的分解作用還能將中藥中本身具有的毒性物質進行分解，從而降低藥物的毒副作用。微生物強大的分解作用也有可能將中藥中帶有的重金屬，農藥，抗生素等成分分解成其他對身體無害的物質。
四、複方中藥湯劑應用微生物發酵的遠大意義和前景
以上覆方中藥湯劑發酵成功的研究例子雖然不多但充分展示了其發酵的遠大意義和前景。從中我們也可以得到新的思路和啟發。中國傳統中醫發展了幾千年，到如今已有的經典方，驗方不知其數，如果將這些方子都進行發酵研究的話，我們會有很多事情需要研究。從幾年前非典在全球的肆意妄為，到如今禽流感在全球流行嚴重，我們也可以從中去尋找新的抗病毒的藥物。許多中藥經過發酵後產生了抗腫瘤的效果，那麼今後研究新的抗腫瘤卻不帶毒副作用的藥物又有了新的途徑。還有，中藥製劑種類很多，有丸，膏，散，粉等，其中煎劑最易吸收，但是眾所周知，中藥湯劑的味道恐怕沒人喜歡吧，這也是阻礙中藥向全球發展的一個重大原因。如果我們將中藥湯劑經過發酵後，不但有很多好的功效，而且在口味上來一個巨大的改變，不是原來的苦澀難喝，而變成酸酸甜甜男女老少都愛喝的話，那麼由此產生的經濟效益和社會效益將不可估量。但是目前還沒有研究報道中藥經過發酵後，其口味是否發生了改變。古人對中藥發酵都是通過自然發酵而成，而現代研究手法都是利用單一的菌種人為引起發酵，試想，如果我們也將中藥湯劑和古人一樣利用自然來發酵，就類似泡菜發酵，其功效和口味將會有怎樣的結果呢？筆者試目以待。
綜上所述，由於複方中藥本身在中藥新藥研究開發方面具有的獨特優勢，微生物發酵法的應用不但可擴大中藥治療範圍，而且在劑型改進、口味變更及創制新藥等研究方面可提供新的思路和技術手段，有望給中藥新藥研究開發注入新的活力並帶來爆炸性的變革，具有廣闊的前景和巨大的發展空間。還有利於推進中藥現代化和國際化進程，提高我國中藥的國際競爭力，為中藥走向世界、造福全人類做出新的貢獻。
