：随着中药现代化的不断进展，中药治疗疾病达到了分子水平的研究。中药含有多种化学成分，其中许多成分对人体有害，诱导致癌、致畸。中药现代化的目标就是要用现代化的科技手段去其糟粕，取其精华，提纯中药中有益的单一的化学成分，达到疗效确切，质量可控，以符合国际标准。这就要求临床医生对中药中有益的单一的化学成分进行抗疾病的药理学及疗效观察研究。 癫痫是小儿神经系统中常见病、多发病。小儿癫痫的患病率为3‰~6‰[1]，且有增加的趋势。根据古代文献及现代医家验证，中药石菖蒲对癫痫有确切疗效。中药石菖蒲含有多种化学成分，其中许多成分对人体有害，诱导致癌、致畸。α-细辛醚是石菖蒲的主要成分，安全性好，临床上已在呼吸系统疾病中使用。本研究通过现代分子生物学及免疫学方法探讨中药石菖蒲及其主要成分α-细辛醚抗癫痫幼鼠的临床观察及机制研究。 我们选用21~28d的Wistar幼鼠作为研究对象，开始21d的Wistar幼鼠用戊四氮(PTZ)60mg/kg腹腔注射制作癫痫模型，模型成功与否以其发作时的行为变化为主要依据，按Racine分级：0级，无任何反应;1级，面部阵挛，包括眨眼、动须、节奏性咀嚼等;2级，1级加节律性点头;3级，2级加前肢阵挛;4级，3级加后肢站立;5级，4级加摔倒。达到4~5级的幼鼠选用，未达到4级的幼鼠淘汰。选用的癫痫模型幼鼠随机分为生理盐水组(A组)、苯巴比妥钠组(B组)、石菖蒲组(C组)、α-细辛醚组(D组)，每组各10只。采用灌胃方法，一日2次，共7d。按章元沛主编的《药理学实验》(第2版1999年附录五)，人和动物药物剂量换算法，生理盐水0.5ml/次，苯巴比妥钠18mg/kg/d(相当于人3mg/kg/d)，石菖蒲2350mg/kg/d(相当于人400mg/kg/d)，α-细辛醚29mg/kg/d(相当于人5mg/kg/d)剂量灌胃。7d后，即对28d的Wistar幼鼠再给予一次戊四氮(PTZ)60mg/kg腹腔注射后，分别进行考察以下指标。 WP=98 第一部分 石菖蒲及其成分α-细辛醚对幼鼠电刺激反应性和电致惊厥阈的影响 目的 观察石菖蒲及其成分对幼鼠电刺激反应性和电致惊厥阈的影响，以阐明石菖蒲及其成分抗儿童癫痫的有效性。方法 将70只3周龄Wister幼鼠随机分为灌胃组和腹腔注射组，其中灌胃组分为生理盐水组(A组)、苯巴比妥钠组(B组)、石菖蒲组(C组)、α-细辛醚组(D组)，腹腔注射组分为生理盐水组(E组)、苯巴比妥钠组(F组)、α-细辛醚组(G组)，每组各10只。灌胃组于用药前后5d，腹腔注射组于用药前后1h分别给予电刺激，观测电刺激反应性和电致惊厥阈。结果 石菖蒲及其成分α-细辛醚能提高电刺激反应性和电致惊厥阈，治疗前各组无显著差异(P0.05)，治疗后用药组与治疗前用药组及生理盐水对照组比较均有显著差异(P0.01)。治疗后用药组各组比较无显著差异(P.05)。结论 (1)石菖蒲及α-细辛醚能提高幼鼠电刺激反应性和电致惊厥阈，有较好的抗癫痫作用。石菖蒲与α-细辛醚的疗效一致。(2)α-细辛醚是石菖蒲抗癫痫的主要有效成分之一，值得进一步研究。 第二部分 石菖蒲及其成分α-细辛醚对癫痫幼鼠惊厥行为及脑电图的影响 目的 观察中药石菖蒲及其主要成分α-细辛醚(α-Asarone)对癫痫幼鼠行为和额叶放电的影响，为中药石菖蒲及其主要成分α-细辛醚抑痫机制研究提供理论依据。方法 利用脑立体定位手段，将电极埋入幼鼠脑部双侧额叶皮质，记录用药前后由戊四氮(PTZ)诱发癫痫幼鼠脑电变化并观察动物行为的改变。结果 行α-细辛醚、石菖蒲、苯巴比妥钠药物治疗的幼鼠癫痫发作潜伏期显著延长，2h内强直-阵挛发作的次数明显减少，平均持续时间缩短，额叶皮层放电次数减少，与致痫生理盐水灌胃组比较有差异(P0.05)。但α-细辛醚、石菖蒲组上述作用不如苯巴比妥钠组强(P0.05)。α-细辛醚与石菖蒲组上述作用比较无差异(P.05)。结论 α-细辛醚是和石菖蒲一样能有效抑制戊四氮诱发的幼鼠的癫痫发作，但作用不如苯巴比妥钠强。 WP=99 第三部分 石菖蒲及其成分α-细辛醚对癫痫幼鼠运动行为和记忆功能的影响 目的 探讨中药石菖蒲及其成分α-细辛醚对癫痫幼鼠行为运动和空间学习记忆能力的影响。方法 50只Wistar幼鼠随机分为未致痫的生理盐水组(NG)和致痫的生理盐水组(A)、苯巴比妥钠组(B)、石菖蒲组(C)、α-细辛醚组(D)。动态观察各组在斜板试验、悬吊试验、自主活动试验中行为运动的变化以及在Morris水迷宫中空间学习记忆能力的改变。结果 ①在斜板试验中，A组 致痫生理盐水灌胃组转体时间最长，较其他各组差异有显著性(P0.05);B组 苯巴比妥钠灌胃组次之，较NG、C、D三组差异有显著性(P0.05);NG、C、D三组间差异无显著性(P.05)。②悬吊试验中，A组悬吊能力受损，表现为悬吊时间缩短，并随惊厥次数的增加而加重，和其他四组比较差异有显著性(P0.05);B组次之，较NG、C、D三组差异有显著性(P0.05);NG、C、D三组间差异无显著性(P.05)。③自主活动试验中，同其他四组相比，A组幼鼠的自主活动能力受损，自主活动性最差，差异有显著性(P0.05);B组次之，较NG、C、D三组差异有显著性(P0.05);NG
【关键词】：癫痫 石菖蒲 α-细辛醚 苯巴比妥钠 Wistar幼鼠 脑海马CA1、CA3区 电刺激 脑电 斜板试验 悬吊试验 自主活动试验 Morris水迷宫 免疫组化 HE和TUNEL染色 Bax和Bcl-2基因 原位杂交 谷氨酸脱羧酶(GAD67)mRNA、氨基丁酸转氨酶(GABA-T)mRNA和谷氨酸受体(NMDAR1)mRNA 、γ-氨基丁酸受体A类β亚单位(GABAARβ)mRNA.
