具有潜力的胰腺癌免疫原性膜抗原－VDAC2

  　【摘要】 目的：应用蛋白质组学技术筛查、鉴定胰腺癌相关免疫原性膜抗原。
　　方法： 培养、提取并纯化胰腺癌细胞株SW1990的膜蛋白，将膜蛋白通过二维双向凝胶电泳（2DE）进行分离，平行的2DE凝胶分别行考马斯亮蓝染色和免疫印迹杂交。收集并纯化临床上66例胰腺癌、24例慢性胰腺炎患者血清中的IgG，分别与膜蛋白2-DE平行凝胶进行免疫印迹杂交。杂交阳性蛋白位点应用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱分析与肽质指纹库鉴定。应用RT-PCR、实时荧光定量PCR、Western blot等方法，分别在细胞株、组织层面，从基因与蛋白质两个水平对筛查出的膜抗原进行有效性验证，并比较不同胰腺癌细胞株、正常胰腺组织中目的膜抗原的基因及蛋白表达水平的差异。结果 胰腺癌细胞株SW1990膜蛋白与胰腺癌患者血清IgG免疫印迹杂交共出现9个阳性点，与慢性胰腺炎IgG杂交所出现的2个阳性点无重复，经质谱分析鉴定出VDAC2是非常具有潜力的候选膜抗原。经RT-PCR和Real time-PCR实验证明，候选膜抗原VDAC2的基因在胰腺癌细胞株SW1990、AsPc、P3的细胞中均有表达。Western blot结果表明，候选膜抗原VDAC2在胰腺癌细胞株中的蛋白表达明显高于正常胰腺组织。
　　结论： 胰腺癌细胞膜蛋白VDAC2可能是具有免疫原性胰腺癌相关膜抗原，并且其基因在胰腺癌细胞株SW1990、AsPc、P3中均有表达，并且在胰腺癌细胞株中的蛋白表达水平明显高于正常胰腺组织。