耳鏡檢查
先天性膽脂瘤侵犯鼓膜前，可見鼓膜完整但常呈灰白色、並飽滿感。後天性膽脂瘤多呈鼓膜鬆弛部穿孔或鼓膜後上方邊緣性穿孔，有時伴上鼓室外側壁或外耳道後上壁近鼓環處骨壁的破壞，穿孔邊緣可有肉芽或息肉，鼓室內有角化物堆積，分泌物有惡臭。鼓膜緊張部完整者，宜用鼓氣耳鏡檢查。若鼓膜緊張部活動而外觀正常，則估計中、下鼓室已被鼓室隔封閉而未受膽脂瘤侵及。
聽力測驗
鼓膜鬆弛部穿孔而緊張部基本正常者，如純音聽力測驗氣，骨導差小於20dB時則提示聽骨鏈仍完整。氣、骨導差在30dB左右，往往提示鼓膜與鐙骨或前庭窗接觸，自然形成鳥聽骨或小鼓室作用。氣、骨導差大於50dB，提示聽骨鏈中斷。
影像學檢查
乳突X線平片檢查對較大的膽脂瘤有一定的診斷價值。高分辨率CT掃描可以顯示中耳骨壁破壞的情況，骨質破壞的邊緣濃密、銳利。膽脂瘤的範圍以及周圍組織受侵犯的情況均能清晰顯示，特別是較小的上鼓室膽脂瘤對上鼓室外側壁的輕微破壞採用冠狀位掃描，能早期發現。
