1.穿刺部位選擇 ①髂前上棘:常取髂前上棘後上方1～2cm處作為穿刺點，此處骨面較平，容易固定，操作方便安全;②前後上棘:位於骶椎兩側、臀部上方骨性突出部位;③胸骨柄:此處骨髓含量豐富，當上述部位穿刺失敗時，可作胸骨柄穿刺，但此處骨質較薄，其後有心房及大血管，嚴防穿透發生危險，較少選用;④腰椎棘突:位於腰椎棘突突出處，極少選用。
2.體位 胸骨及髂前上棘穿刺時取仰臥位。髂後上棘穿刺時應取側臥位。腰椎棘突穿刺時取坐位或側臥位。
3.常規消毒皮膚，戴無菌手套、鋪消毒洞巾，用2%利多卡因作局部浸潤麻醉直至骨膜。
4.將骨髓穿刺針固定器固定在適當長度上(髂骨穿刺約1.5cm，肥胖者可適當放長，胸骨柄穿刺約1.0cm)，以左手拇、示指固定穿刺部位皮膚，右手持針於骨面垂直刺入(若為胸骨柄穿刺，穿刺針與骨面成30～40°角斜行刺入)，當穿刺針接觸到骨質後則左右旋轉，緩緩鑽刺骨質，當感到阻力消失，且穿刺針已固定在骨內時，表示已進入骨髓腔。
5.用乾燥的20ml注射器，將內栓退出1cm，拔出針芯，接上注射器，用適當力度緩慢抽吸，可見少量紅色骨髓液進入注射器內，骨髓液抽吸量以0.1～0.2ml為宜，取下注射器，將骨髓液推於玻片上，由助手迅速製作塗片5～6張，送檢細胞形態學及細胞化學染色檢查。
6.如需作骨髓培養，再接上注射器，抽吸骨髓液2～3ml注入培養液內。
7.如未能抽得骨髓液，可能是針腔被皮膚、皮下組織或骨片填塞，也可能是進針太深或太淺，針尖未在髓腔內，此時應重新插上針芯，稍加旋轉或再鑽入少許或再退出少許，拔出針芯，如見針芯上帶有血跡，再行抽吸可望獲得骨髓液。
8.抽吸完畢，插入針芯，輕微轉動拔出穿刺針，隨將消毒紗布蓋在針孔上，稍加按壓，用膠布加壓固定。
