構建免疫球蛋白與細胞因子融合基因做家族特異性抗淋巴瘤疫苗...

目的：構建免疫球蛋白重鏈可變區（IgHV）基因片段與細胞因子GM-CSF（粒細胞集落刺激因子）或IL-2（白細胞介素2）的融合基因表達載體，作為家族特異性抗淋巴瘤核酸疫苗，並接種給動物，瞭解該疫苗的抗淋巴瘤免疫功能。
方法：從臍帶血免疫球蛋白基因庫中獲得6個片段長度差異較大的IgHV3片段基因，進行測序，然後利用生物信息學資源進行分析，預測其重鏈可變區域的T細胞表位，同時還分析了我們實驗室以前構建的16個IgHV片段。我們選擇了含有大部分T細胞表位的IgHV1和IgHV3基因，並將框架區（FR）為主的IgHV（FR）基因片段和IgHV（FR）與GM-CSF或IL-2基因連接形成的融合基因克隆到真核表達載體中。表達載體通過脂質體轉染COS細胞，用ELISA法測定GM-CSF或IL-2的表達。一些表達載體被用作核酸疫苗來免疫小鼠，通過間接免疫熒光和細胞因子分泌試驗檢測對同一家族的淋巴瘤和正常淋巴細胞的免疫反應。
結果：計算機評分系統預測顯示，每個IgHV序列中分別存在約30個左右受HLA位點限制的T細胞表位，90%以上的T細胞表位位於框架區，積分排名中前10%的T細胞表位全部位於框架區。成功構建了IgHV1(FR)和IgHV3(FR)的真核表達載體，去除CDR3區域後，主要是框架區(FR)。成功構建了IgHV1和IgHV3基因與GM-CSF或IL-2基因的融合基因表達載體。IgHV(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0中GM-CSF的表達量比對照組高出200倍以上；IgHV(FR)-IL-2/pcDNA3.0中，IgHV1(FR)-IL-2免疫動物組在第一次免疫後第2周開始檢測到針對屬於IgHV1家族的淋巴瘤Namalwa細胞系的抗體，IgHV1(FR)組在第4周開始檢測到抗Namalwa細胞抗體。IgHV3(FR)-IL-2組在第一次免疫後第2周開始檢測針對屬於IgHV1家族的淋巴瘤Namalwa細胞系的抗體。第一次免疫後第2周開始檢測到針對屬於IgHV3家族的傳代淋巴細胞系的抗體，IgHV3(FR)組在第4周開始檢測到抗體。IgHV(FR)-IL-2組免疫小鼠的血清IFN-γ水平明顯高於pcDNA3.0和IgHV(FR)組。