臨床和實驗室發現急性肝炎的患者，結合HBsAg陽性，可以確診。然而，在一些急性乙型肝炎患者中，他們的血液中可能檢測不到HBsAg（HBsAg一直是陰性或檢測不敏感），對於這樣的患者，我們必須依靠HBsAg以外的其他指標。第二，無症狀的乙肝表面抗原攜帶者在中國相當普遍。這些患者如果合併其他類型的急性肝炎（如甲肝、丙肝、EB病毒或CMV病毒性肝炎、中毒性肝炎等），由於其血液中HBsAg陽性，很容易被誤診為急性乙肝，有時很難將這類患者與真正的急性乙肝相區別。
診斷急性肝炎患者一般沒有甚麼困難，尤其是急性黃疸型：急性發病；突然出現明顯的疲勞和虛弱，沒有其他解釋，並有明顯的胃腸道症狀；大約一週後出現黃疸；肝臟輕度至中度腫大，有觸痛；血清ALT值非常高。沒有黃疸的人有時沒有明顯的體徵或症狀，但如果發病確實很急，有胃腸道症狀和肝臟腫大，ALT非常高，通常不是很困難。
一般認為，可以根據以下情況確認患者存在乙肝病毒：
①HBsAg陽性。(2）抗HBcIgM抗體陽性，特別是效價很高時，往往代表患者體內存在乙肝病毒。3）DNA多態性酶活性明顯升高或e抗原陽性。血液中出現丹毒顆粒或肝臟活檢組織中出現HBsAg或HBcAg也表明體內存在病毒。
確定病人的急性肝炎確實是由乙肝病毒引起的，而不是由乙肝病毒攜帶者的其他原因引起的急性肝炎。患者的乙肝表面抗體（抗-HBs）在急性期和恢復期由陰性轉為陽性或滴度增加4倍或更多。(2）急性期和恢復期的雙份血清，乙肝核心抗體（抗-HBc）增加4倍或以上。
