糖原累积症产前如何诊断

　　G6Pase是糖原分解和葡萄糖生成过程中的关键酶，主要在肝脏、肾脏和小肠中表达，对维持正常血糖水平发挥重要作用。它位于17号染色体长臂2区1带，约有12.5kb，包含5个外显子。G6Pase蛋白为细胞内质网膜蛋白，包含357个氨基酸，为高度疏水性蛋白，有9个跨膜单位，其N端位于内质网腔内，C端位于质膜上。在G6Pase基因克隆以前，产前诊断需通过胎儿肝穿活检测定G6Pase的活性进行，因这种检查为有创性的检查而且酶活性测定的重复性差而很少使用[5]。近年，随着G6Pase cDNA的克隆，世界各地的G6Pase基因突变谱和突变热点逐渐得以明确，使通过分子生物学方法进行产前诊断成为可能。迄今，G6Pase基因编码区已发现70余种突变。国外文献报到了4个经突变检测法进行产前诊断的GSD Ia家系[6～9]。研究发现在不同种族和地理来源的人群中有几种常见的突变类型，如R83C和Q347X突变在白种人中最常见 [10]。我们近来的研究发现727G→T突变占26例中国人GSD Ia患者总突变的78.85％，R83H突变占26例患者总突变的13.46％，727G→T和R83H突变合计约占总突变的92％，为中国人中最常见的热点突变[11]。突变的集中性使在中国人中开展基因诊断和产前诊断成为可能，可以首先应用限制性内切酶图谱分析方法进行727G→T和R83H突变的筛查，再对其他突变通过DNA直接测序进行检测。本研究的3个家系正是采用该方法迅速明确了基因诊断和产前诊断。
　　产前诊断是防止遗传代谢性疾病发生的有效措施之一，最好联合使用不同的方法确保诊断准确而快速。多态性连锁分析是进行基因诊断和产前诊断的间接途径，在具体家系中用基因内或旁侧的多态性位点或片段进行单倍体连锁分析，根据与致病基因连锁的多态性位点或片段进行间接诊断。研究发现G6Pase的3’非翻译区1176位点单核苷酸有T或C多态性（Genbank U01120），我们以往的研究发现中国人中1176C约占46％ （24/52），1176T占54％ （28/52），中国人中这个单核苷酸多态性位点多态信息含量和杂合度较高，分别为0.372和0.50[11～12]。G6Pase基因全长12.5kb，1176T/C距离G6Pase最后1个外显子只有22bp,  故1176T/C与G6Pase基因突变位点发生基因重组的几率可忽略不计，这就使1176T/C对GSD Ia家系的产前诊断和携带者诊断有很大意义。本研究中家系1的父母均为1176T/C杂合子，先证者为1176C纯合子，胎儿为1176T/C杂合子，在这个家系中可以仅通过1176多态性位点家系连锁分析就可做出明确的产前诊断。家系2和3的父亲为1176T/C杂合子，母亲为1176C纯合子，先证者为1176C纯合子，在这个家系中1176位点单核苷酸多态性仅可提供50％的信息，即只有当胎儿1176位点单核苷酸多态性为1176T/C时方能对胎儿做出明确的产前诊断，当胎儿1176位点单核苷酸多态性为1176C纯合时无法做出产前诊断。