儀器設備
1、 醫用微波爐;
2、 水浴鍋;
3、熒光顯微鏡;
4、數字顯微照相機。
FISH試劑
(1)1×PBS：由10×PBS溶液稀釋而成，儲存於4℃;
(2)20×SSC(pH7.0);
(3)2×SSC，由20×SSC溶液稀釋而成;
(4)25mg/ml蛋白酶K消化液。
(5)變性液(70%甲酰胺+2×SSC，pH7.0)：4ml 20×SSC;8ml蒸餾水;28ml甲酰胺。每次新鮮配製。
(6)雜交後洗滌液： 20×SSC 4ml;蒸餾水16ml;甲酰胺20ml。每次新鮮配製。調節pH前升至室溫。(7)封閉液I：體積分數5% BSA 3 mL，20×SSC 1 mL，ddH2O 1mL，Tween20 5 μL混合。
(8)封閉液II：體積分數5% BSA 3mL，20×SSC 1mL，goat serum 250 μL，ddH2O 750 μL，Tween20 5 μL混合。
(9)熒光檢測試劑稀釋液：體積分數5% BSA 1mL，20×SSC 1mL，ddH2O 3mL，Tween20 5μL混合。
實驗步驟
1、脫蠟：
1)二甲苯脫蠟3次，每次5min;
2)100%酒精兩次，每次2min;
3)移出酒精，斜置切片，標記末段向下，空氣乾燥。
2、蛋白酶處理:
1)每個染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配製方法如下：2×SSC 40ml倒人Facal管，在水浴槽中預熱。將消化酶液加入管內，搖動直到酶溶解。
2) 37℃水浴槽中預熱染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20min。
3) ×SSC在室溫下漂洗切片3次，每次1min。
4)梯度酒精脫水(-20℃預冷)。
3、變性：
1)每一個立式染色缸配製40ml變性溶液;
2)78℃水浴槽中平衡預熱混合液染色缸;
3)78℃孵育8min;
4) 即移入-20℃預冷70%酒精的染色缸內2min，再依次移入80%、90%和100%的-20℃預冷酒精內，每缸2min;
5)空氣乾燥。
4、雜交：
1)準備探針;
2)取一個較大的溼盒，交叉放置切片;
3)滴10μl探針在切片的組織上，加蓋玻片;
4)蓋上溼盒蓋，37℃孵育12h～16h。
雜交後的水洗：
5)鑷子小心去除蓋玻片;
6)43℃預熱雜交後水洗溶液40ml水洗切片15min;
7)2×SSC(37℃)洗兩次，每次10min;
8)切片放人染色缸的1×PBS內待檢測，勿使切片乾燥。
檢測：
9)從1×PBS中取出切片，除去過多的水分，避免標本乾燥。把切片放入溼盒內，同時處理4張切片。
10)每張切片使用30μl～60μl羅丹明抗-地高辛抗體或FITC卵白素，室溫下孵育20min;
11)去掉塑料蓋膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室溫下洗3次，每次2min。
12)從1×PBS中取出切片，斜置切片使液體排出;
13)每張切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗體，加塑料蓋膜，室溫孵育20min;
14)去掉塑料蓋膜，把切片放人含1×PBS的染色缸。1×PBS室溫下洗3次，每次2min;
15)從1×PBS中取出切片，斜置切片使液體排出;
16)每張切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗體，加塑料蓋膜，室溫孵育20min;
17)1×PBS室溫下洗3次，每次2min。
5、細胞核染色：
1)張切片加10μl～20μl DAPI，覆蓋蓋玻片並在室溫下孵育2～5ml;
2)儘可能快的在熒光顯微鏡下觀察或封閉盒內保存在-20℃冰箱。切片在染色之後1h內可以在顯微鏡下觀察。
6. 熒光顯微鏡觀察FISH結果
先在可見光源下找到具有細胞分裂相的視野，然後打開熒光激發光源，FITC的激發波長為490 nm。細胞被PI染成紅色，而經FITC標記的探針所在的位置發出綠色熒光。
