根據上述典型的體徵,結合心電圖、胸部X線和心臟超聲檢查,診斷房間隔缺損一般並無困難。對於非典型的患者或疑有其他合併畸形者,心導管檢查可提供幫助。需與房間隔缺損相鑑別的病症主要有單純肺動脈瓣狹窄、原發性肺動脈擴張。
1.單純肺動脈瓣狹窄的肺動脈瓣區收縮期雜音性質粗糙、響亮,並常可捫及震顫,肺動脈瓣區第二心音減弱甚至消失。胸部X線片可見肺動脈段明顯突出,但肺血少於正常或在正常範圍,心臟超聲檢查可明確診斷。右心導管檢查右心房與腔靜脈血氧含量無顯著差異,右心室與肺動脈壓力階差超過20mmHg。
2.原發性肺動脈擴張也可在肺動脈瓣區聽到Ⅱ級收縮期雜音,胸部X線片可有肺動脈段突出,但肺血正常,心臟超聲檢查房間隔無回聲中斷和分流,右心導管檢查右心房、右心室無血氧含量改變,右心室和肺動脈間無壓力階差。