出現頑固性上腹痛，疼痛放射至腰背部，夜間明顯，仰臥時加重，而蜷曲或前傾坐位可使疼痛減輕等，則高度提示胰腺癌，需進一步做實驗室及其他輔助檢查。
B超、CT、MRI、ERCP、PTCD、血管造影、腹腔鏡檢查、腫瘤標誌物測定、癌基因分析等，對胰腺癌確定診斷和判斷能否手術切除有相當大的幫助。一般情況下B超、CA19-9、CEA可作為篩選性檢查，一旦懷疑胰腺癌，CT檢查是必要的。病人有黃疸而且比較嚴重，經CT檢查後不能確定診斷時，可選擇ERCP和PTCD檢查。如置管引流成功，對嚴重黃疸患者可延遲手術1～2周。MRI對胰腺癌的診斷價值並不優於CT。對已確診為胰腺癌但又無法判斷能否手術切除時，選擇血管造影和(或)腹腔鏡檢查是有臨床意義的。
對不能手術切除，也沒有姑息手術指徵的胰腺癌或壺腹周圍癌患者，擬行化療和放療時，行細針穿刺獲取細胞學檢查是必要的。對有手術切除可能的患者一般不行此檢查。因為細針穿刺有可能導致癌細胞在腹腔內的播散。
