14.2 病原體檢查
(1)鉤體的直接檢查：①暗視野顯微鏡檢查：鉤體不易著色，而未經染色的標本鉤體在光學顯微鏡下通常難以看清。用暗視野顯微鏡，可以清楚地看到鉤體典型特徵的形態和運動方式，通常用以檢查體液或組織中的鉤體，可以提供快速診斷的結果。但是，由於鉤體在血液或組織中濃度過低(≤2×104條/ml)而不易檢查出來，特別是對人的自然感染。另一方面由於檢驗者經驗不足，很容易將其他成分如纖維蛋白絲誤認為鉤體，一般在基層不宜推廣，但適用於實驗感染動物的檢查。②染色直接鏡檢：有鍍銀法、復紅亞甲藍染色法與吉姆薩染色法。
(2)鉤體的分離培養：在鉤體病早期，即發病1周內在外周血及腦脊液中，有相當多的鉤體出現，因而在此期採血接種於含兔血清的科索夫(Korthof)或弗勒喬(Fletcher)半固體培養基內，可緩慢生長，一般在1周以上，陽性率達30%～50%。如已用過青黴素類藥物，培養基中可加入青黴素酶。如在培養基中加入氟尿嘧啶(5-FU)，可選擇性地抑制或殺滅雜菌，純化培養，但對鉤體的繁殖也可受到輕度的抑制。尿培養可在病程晚期呈陽性。
(3)動物接種：常用幼齡豚鼠或金地鼠腹腔內注射接種，一般不作常規應用。
14.3 血清學試驗
發病1周後，血液中出現特異性抗體，可應用血清學試驗測定。
(1)顯微鏡凝集試驗(microscopic agglutination test，MAT)：顯微鏡凝集試驗簡稱顯凝試驗，此試驗是應用活標準菌株作抗原，與可疑患者血清混合，在顯微鏡下觀察結果。如有特異性抗體存在，即可見到凝集現象。一次血清效價到達或超過1/400，或早、晚期兩份血清比較，增加4倍者即有診斷意義。此法是目前使用最廣泛的鉤體血清學方法之一，既可用於診斷患者，亦可用標準抗血清作鉤體菌株鑑定。
(2)酶聯免疫吸附試驗：國內報告採用此法檢測鉤體病血清特異性抗體與顯凝試驗相比，其靈敏性與特異性均較常用的顯凝試驗為高，但仍無法用於早期診斷。
(3)間接紅細胞凝集試驗：此法是從鉤體菌體中提取一種抗原成分，將其吸附於人“O”型紅細胞表面，使紅細胞致敏，如遇同屬抗體，則發生紅細胞凝集現象，故稱間接紅細胞凝集試驗。本試驗具屬特異性而無群成型的特異性，較顯凝試驗陽性出現早，操作簡便，不需特殊設備條件，適合基層推廣應用。
(4)間接紅細胞溶解試驗：國外常用作鉤體病診斷方法。當新鮮綿羊紅細胞用鉤體抗原物質致敏後，在補體存在的條件下與含有抗體的血清混合時發生溶血，其靈敏性較間接紅細胞凝集試驗為高。
(5)間接熒光抗體法：此法是先將標準鉤體菌株作成塗片，然後將可疑患者的血清滴在有菌的玻片處，經洗滌，如患者血清中具有抗體，抗原抗體結合起來，再用抗人球蛋白熒光抗體與此複合物結合，發生熒光，即為陽性，此法無型特異性。
(6)補體結合試驗。
以上各種方法都是應用特異性抗原來測患者體內的特異性抗體。至於應用特異性抗體來測定體內抗原作為疾病的早期快速診斷的方法近年已有相當的進展，特別是單克隆製備技術的應用使診斷早期鉤體血癥中數量不多的鉤體成為可能。隨著分子生物學的技術發展和應用，鉤體DNA探針已製備成功。並已成功建立了聚合酶鏈反應方法早期診斷鉤體病。但這些方法要用於臨床，均有待進一步改進和完善。
