隨著內眼手術的大量開展,角膜內皮的損傷逐漸增多,但由於角膜內皮細胞的非再生性,給臨床治療帶來了許多困難,因此進一步探索影響內皮修復的因素將是眼科的一個課題。有研究表明,在房水中大量存在的轉移性生長因子β2(TGF-β2)可以上調角膜內皮細胞中p27kip1(一種細胞週期蛋白依賴性激酶抑制劑)的表達,而p27kip1的表達可以抑制角膜內皮細胞的分裂,所以TGF-β2對角膜內皮細胞的增殖修復起到了抑制作用。Smad是一個新的蛋白家族,角膜內皮細胞可以表達Smad2、3、4和7。本實驗利用Smad7阻斷TGF-β2的細胞內信號傳導,從而拮抗TGF-β2對角膜內皮細胞增殖的抑制作用,達到加速角膜內皮損傷修復的目的。
方法。 反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和Western印跡法測定Smad在角膜內皮細胞中的表達;應用[3H]標記的胸苷攝取試驗評價TGF-β2對角膜內皮細胞DNA複製的抑制作用。用免疫印跡雜交法確定Smad7對TGF-β2的抑制作用;用攜帶鼠Smad7 cDNA的腺病毒(AdCMV- Smad7)和攜帶鼠LacZ cDNA的腺病毒(AdCMV-LacZ)作為對照,轉染表達Smad7的兔角膜內皮細胞,在內皮細胞機械損傷的條件下觀察內皮修復過程。
結果: 1.體外培養的兔角膜內皮細胞表達Smad7;2.TGF-β2明顯抑制了兔角膜內皮細胞的DNA複製;3.過表達的Smad7在兔角膜內皮細胞中表達。過量表達的Smad7取消了外源性TGF-β2對內皮細胞的抗增殖作用,而LacZ則沒有;4.帶Smad7的腺病毒轉染到兔角膜內皮細胞,加速了角膜內皮損傷的修復。
結論:Smad7的過量表達抑制了TGF-β2的抗內皮細胞增殖作用,通過改變Smad7在角膜內皮細胞中的表達,可以實現角膜內皮損傷的癒合。在體外,角膜內皮損傷的修復包括內皮細胞的增殖和遷移,而表達Smad7的角膜內皮細胞的遷移過程先於增殖過程,過量表達Smad7主要影響內皮細胞的遷移過程。作者總結說,改變角膜內皮細胞中Smad7的表達可能對內皮細胞修復有一定的臨床治療前景。