PRP是運動損傷和骨關節炎的良好選擇

　　富血小板血漿( plate let rich plasma, PRP) 是自體全血經過梯度離心、分離得到的血小板濃縮物, 血小板含量豐富。當血小板激活時, 能釋放多種生長因子,它們在促進骨細胞和成骨細胞的增殖、生長、分化和組織的形成過程中起著重要的作用。自1998年Marx等首次用PRP複合移植骨修復下頜骨缺損以來，PRP已逐漸應用於口腔、整形、骨科、耳鼻喉科、神經外科等領域的組織修復中。本文現就PRP的分離、製備和其在骨科領域的應用以及存在問題進行綜述, 並對其應用前景作一展望。
　　1、PRP的分離和製備    PRP是根據血液中各組成成分沉降係數不同，通過密度梯度離心法將PRP從全血中分離出來的PLT濃縮物，但目前尚無統一的製備方法。  不同離心次數、離心力、離心時間以及PLT不同的激活方式所製備的PRP中，PLT數量、各種生長因子濃度、白細胞數量各不相同；且各種手術方式以及應用PRP的時間亦產生不同的生物效應，因此產生了對PRP生物效應的分歧。根據不同生理病理需要，製備不同生長因子含量的PRP是未來研究的方向。             PRP的製備方法大體可分為手工製備和全自動製備兩種。手工製備過程較繁瑣，但所需設備簡單，易於開展。全自動製備需要特殊設備，目前常用設備有SmartPReP 系統、Trissee 系統、Platele concentrate collection系統、Curasau 系統等。手工操作分離法與全自動血小板分離機分離法在離心後，血小板數量無明顯差異，雖然全自動血小板分離機操作簡便，自動化程度高，製備得到的PRP血小板純度和濃度均高，但此方法一般用於用血量較多(一般在150ml以上)或需建立靜脈循環通道，目前主要用於血庫血小板的採集以進行成分輸血，因其成本較高，限制了其在臨床的廣泛應用。但無論是何種製作方法，其製備原理均相似，即根據血液中各組分的沉降係數進行分層製備。1次離心後血液可分為3 層，最底層是沉降係數最大的紅細胞，最上層是上清液，交界處有一薄層，即富血小板層。一次離心後棄去上清液或紅細胞層，然後改變離心力再次離心，可分離更多血小板。兩次離心法仍是目前製備PRP的常用方法。劉彩霞等比較了動物模型中不同離心力和離心時間所製備的PRP對牽張成骨的影響，結果顯示應用Landesberg法以兩次離心（每次200 × g、離心10 min）法制作的PRP血小板計數明顯高於全血，為全血的6.17 倍；血小板回收率超過86％，促進新骨生成的作用較明顯。離心力> 250 × g時會導致血小板破壞過多，而一次離心時間< 5 min得到的PRP血小板濃度與全血無明顯差異。Marx等在製作PRP時發現，先進行高速離心，1次離心後界面以下2mm的紅細胞層血小板濃度最高，棄去上清液後再次以低速離心，這樣可更好地提取血小板。但多數學者研究認為，採用改良Appel法，即先以低速離心後吸取全部上清液、交界層下少部分紅細胞置於另一支離心管，然後高速離心，所得的血小板回收率較高。
　　2、富血小板血漿的作用機理     PRP的作用是通過生長因子的相互作用和相互調節下完成的, 生長因子分泌後立即黏附至靶細胞膜表面，激活細胞膜受體。這些膜受體再誘導出內在的信號蛋白，激發細胞正常的基因序列表達。因此，PRP釋放的生長因子不進入靶細胞內，不會導致靶細胞的遺傳性能發生改變，僅使正常癒合過程加快。雖所有參與組織修復與重建的細胞因子作用機制仍不明確，但是細胞因子對組織修復與重建的部分作用已經明確，如：PDGF是最早出現在骨折部位的生長因子之一, 可以刺激骨髓基質細胞的有絲分裂,增加成骨細胞的數量; 刺激內皮細胞的生長, 促進受植區的毛細血管的生成; 還可以刺激單核巨噬細胞的趨化。作為一種促進有絲分裂和生物趨化因子, 可以在創傷骨組織中高度表達, 促進成骨細胞的趨化、增殖, 並增加膠原蛋白合成的能力 ；TGF-β以旁分泌和/或自分泌的方式作用於成纖維細胞、骨髓幹細胞、成骨前體細胞和破骨細胞, 刺激成骨前體細胞及成骨細胞的趨化、有絲分裂及膠原纖維的合成, 抑制破骨細胞的形成和骨吸收, 在骨折修復中具有極為重要的作用 ；IGF促進成骨細胞的增生和遷移作用, 提高成骨細胞活力 ; VEGF可誘導內皮細胞增殖遷移從而促進新生血管形成等。另外，激活的PLT同時釋放大量蛋白質，這些蛋白質對組織再生均有重要意義。凝血酶可以募集周圍組織血管內皮細胞，增強其活力，人體臍靜脈三維培養條件下，凝血酶可刺激成纖維細胞增殖及新生毛細血管形成，同時可誘導負反饋，從而限制新生毛細血管合成。纖維蛋白刺激角化細胞遷移，實現細胞和細胞間的相互作用，對細胞形態恢復具有重要意義。
　　3、展望    採用生物的方法解決生物和醫學問題是目前研究組織修復的熱點。PRP完全是自體的, 無疾病傳染及免疫排斥反應, 從根本上解決了傳播疾病的危險及骨組織工程學一直面臨的移植物難以存活的難題; PRP中含有多種高濃度的生長因子, 各生長因子的比例與體內正常比例相似, 並具有最佳的協同作用, 既有單一因子的生物學效應, 又有各種生長因子之間的相互作用。這在一定程度上彌補了單一生長因子刺激成骨效果不佳的缺點, 滿足了早期骨癒合所需生長因子的需要; PRP有促凝血的作用, 可刺激軟組織再生, 促進傷口早期癒合; PRP中所含的生長因子不進入細胞內或細胞核內,使正常的癒合過程加速, 無致畸作用, 也不具有誘導腫瘤形成的能力; PRP製作簡單且對患者的損傷小, 只需從患者的靜脈取血即可製作PRP, 國外已有專門製作PRP的儀器, 操作簡便並且所需時間短。因此, PRP是一種安全的、簡便的、廉價的可用於骨科的各個治療領域，應用前景廣泛。
　　但PRP用於臨床尤其是在骨科領域仍有許多尚未解決的問題，如PRP製備無統一標準，不同方法制備的PRP生長因子濃度差異大，PRP所含生長因子數量及其生長因子的相互作用機制仍不明確等。因此對PRP研究首先要建立一套高效穩定、對PLT破壞小、純度高而穩定的PRP製備方法; 其次在應用PRP時儘量避免影響PRP療效的因素; 選擇適當的載體使PRP 與載體結合以提高PRP骨再生能力, 建立動物模型, 設計標準化的試驗, 為PRP的臨床應用提供依據。