具有潛力的胰腺癌免疫原性膜抗原－VDAC2

  　【摘要】 目的：應用蛋白質組學技術篩查、鑑定胰腺癌相關免疫原性膜抗原。
　　方法： 培養、提取並純化胰腺癌細胞株SW1990的膜蛋白，將膜蛋白通過二維雙向凝膠電泳（2DE）進行分離，平行的2DE凝膠分別行考馬斯亮藍染色和免疫印跡雜交。收集並純化臨床上66例胰腺癌、24例慢性胰腺炎患者血清中的IgG，分別與膜蛋白2-DE平行凝膠進行免疫印跡雜交。雜交陽性蛋白位點應用基質輔助激光解吸離子化飛行時間質譜分析與肽質指紋庫鑑定。應用RT-PCR、實時熒光定量PCR、Western blot等方法，分別在細胞株、組織層面，從基因與蛋白質兩個水平對篩查出的膜抗原進行有效性驗證，並比較不同胰腺癌細胞株、正常胰腺組織中目的膜抗原的基因及蛋白表達水平的差異。結果 胰腺癌細胞株SW1990膜蛋白與胰腺癌患者血清IgG免疫印跡雜交共出現9個陽性點，與慢性胰腺炎IgG雜交所出現的2個陽性點無重複，經質譜分析鑑定出VDAC2是非常具有潛力的候選膜抗原。經RT-PCR和Real time-PCR實驗證明，候選膜抗原VDAC2的基因在胰腺癌細胞株SW1990、AsPc、P3的細胞中均有表達。Western blot結果表明，候選膜抗原VDAC2在胰腺癌細胞株中的蛋白表達明顯高於正常胰腺組織。
　　結論： 胰腺癌細胞膜蛋白VDAC2可能是具有免疫原性胰腺癌相關膜抗原，並且其基因在胰腺癌細胞株SW1990、AsPc、P3中均有表達，並且在胰腺癌細胞株中的蛋白表達水平明顯高於正常胰腺組織。