1、攝入不足。常見於營養不良、偏食、挑食或進食不良的嬰幼兒。葉酸衍生物不耐熱，長時間烹調或反覆加熱食物會破壞葉酸衍生物，導致攝入不足。
2、吸收障礙。影響空腸粘膜吸收的各種疾病，如短腸綜合徵、熱帶口炎腹瀉和某些先天性疾病的酶缺乏等，都會影響葉酸在小腸的吸收。
3.治療性藥物干擾葉酸代謝：如抗驚厥藥、磺胺嘧啶可引起某些人群的葉酸吸收障礙。甲氨蝶呤等抑制二氫葉酸還原酶，使二氫葉酸不能轉化為具有生物活性的四氫葉酸。口服避孕藥、氟尿嘧啶酰亞胺、異煙肼、乙腈和環絲氨酸可影響葉酸吸收和代謝。乙醇也會影響葉酸的代謝。
4.需要量增加引起相對缺乏：懷孕期間，特別是前3個月，對葉酸的需要量可增加5～10倍此外，哺乳期母親、嬰兒、感染、發熱、甲狀腺功能亢進、白血病、溶血性貧血惡性腫瘤和血液透析時，對葉酸的需要量也會增加，如果不增加葉酸的攝入，會引起缺乏。
