糖原累積病II型如何進行診斷

　　GSD Ⅱ型是一種進行性致死性的代謝性肌病，肌肉組織、皮膚成纖維細胞、外周血淋巴細胞亦可準確檢測GAA活性，但均具一定侷限性，肌肉活檢為有創性檢測，不易為患者接受；皮膚成纖維細胞測定GAA活性被認為是GSDⅡ型酶學診斷的金標準[8]，但從皮膚活檢、細胞培養到酶活性測定至少需要數週時間；淋巴細胞分離純度不高將導致檢測的假陰性。採用阿卡波糖抑制劑下的DBS和白細胞法測定GAA活性，具有無創、準確和快速的特點，對早期確診GSDⅡ型患者具有重要意義。
　　本研究所建立的DBS法測定GAA活性，批內變異在8％以內，批間變異在10％以內，可見該法具有較好的精密度。幹血濾紙片存放在室溫或低於室溫環境4周對GAA活性無明顯影響，37℃存放2周內GAA活性也基本穩定。DBS法採血和保存運輸方便，對外地疑診患者送檢GAA測定提供了極大的便利性和可行性。而且從方法的精密度、標本保存條件以及其高通量檢測的特點，DBS法可較好地滿足新生兒疾病篩查的要求。GSDⅡ型發病率隨人群和地理分佈的不同有很大差異 [1,3]。由於該病臨床表現不特異以及國內臨床醫生對其認識程度有限，迄今中國大陸對GSD Ⅱ的報道迄今僅有31例[10-14]，中國大陸地區的GSD Ⅱ發病率等流行病學資料尚待開展新生兒疾病篩查後進一步明確。
　　本研究所建立了DBS法的正常新生兒組和兒童-成年組GAA活性的中位數分別為27.09和16.36pmol/（punch?h），新生兒組明顯高於兒童-成年組。Meikle等[14]採用免疫定量法檢測的澳大利牙和丹麥正常新生兒組的中位數為46.8 和45.7pmol/（punch?h），而澳大利亞成年組中位數為24.4pmol/（punch?h），Zhang等[7]報道正常成人DBS法GAA中位數為20 pmol/（punch?h），與我們的研究結果類似。由於上述研究中所涉及GSD Ⅱ型患者GAA酶活性均低於明顯低於檢測限，故新生兒組和兒童-成年組的正常值的差異並不影響患者的診斷與篩出。
　　本研究對臨床疑診的4例GSDⅡ型患者進行GAA活性測定明確了診斷。DBS法發現患者GAA酶活性均低於檢測限，提示DBS法能準確區分患者和雜合子。6例雜合子酶活性與正常對照低值區有交叉，故DBS法無法區分雜合子和正常人。白細胞法測定3例患者的GAA活性，發現患者較正常人顯著降低。結合進行性肌無力的臨床症狀和心肌肥厚、肌活檢病理的檢查結果，患兒2診斷為GSDⅡ型嬰兒型，患者3、4診斷為GSDⅡ型遲髮型。
　　綜上所述， DBS法測定GAA活性具有敏感、快速、高通量、樣本便於運輸和保存等優點，適用於GSDⅡ型的新生兒和高危人群篩查和診斷；白細胞法測定GAA活性具有準確、快速、特異性高等優點，適用於可疑患者的確診。